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Technical articles赛默飞世尔科技(Thermo Fisher Scientific)是生命科学领科研仪器和解决方案提供者,其推出的荧光定量PCR仪(qPCR)系列涵盖了多种不同性能和应用需求的产品。其中,Q5 系列(包括 Q5 和 Q5 plus 等变型)因其在多重检测、温控稳定性、软件交互和自动化兼容方面的设计,成为实验室常用设备之一。
荧光定量PCR技术自20世纪90年代以来在分子生物学、临床诊断、环境监测、食品安全、转基因检测等领域迅速普及,Q5 系列仪器作为其中的典型产品,提供了稳定的扩增和实时荧光检测平台。随着设备迭代更新,一些科研机构和企业会将旧型号设备转为二手流通市场,从而降低科研成本、延长设备生命周期。
荧光定量PCR(Quantitative Real-Time PCR)是一种结合传统PCR扩增与实时荧光检测的技术。其基本工作流程包括:
模板加样:将目标DNA或cDNA、引物、荧光探针或染料与反应混合液加入反应孔中。
PCR扩增:通过温度循环(变性、退火、延伸)实现特定DNA片段的指数级扩增。
荧光检测:使用荧光染料(如SYBR Green)或探针(如TaqMan)对扩增产物进行实时监测。
数据处理:仪器软件通过荧光信号强度计算阈值周期(Ct值),用于分析模板初始拷贝数。
Q5 荧光定量PCR仪的设计目标之一,是在这一过程中确保温控精确性和光路系统的灵敏度,以获取准确的数据输出。
以下是 Q5 仪器常见的核心参数,仅供参考,实际配置可能根据出厂批次和型号略有不同:
项目 | 参数 |
---|---|
通量 | 96孔(标准),可支持384孔(部分型号) |
样本体积范围 | 10–100 μL(常见为20–50 μL) |
温控精度 | ±0.25°C |
升降温速率 | 最大 5.0°C/s(依型号而异) |
荧光检测通道 | 4–6通道(支持常见染料,如FAM、VIC、ROX、Cy5) |
检测灵敏度 | 可检测低至1拷贝/μL的DNA模板 |
软件功能 | 可实现绝对定量、相对定量、熔解曲线分析、基因分型等 |
数据导出格式 | 支持.txt、.csv、.xls 等多种格式,便于后期数据分析 |
Q5 PCR仪采用半导体热电控温技术(Peltier加热元件),确保每个孔内温度一致,减少孔间差异对结果的影响。热盖设计可避免样本蒸发,提高扩增效率。
光源为高亮度LED,结合多通道滤光片,实现多色同步检测。荧光信号通过高灵敏CCD传感器接收,自动校正背景,提高检测准确性。
设备搭配专用分析软件,界面清晰,支持Ct计算、标准曲线建立、基因表达量对比分析等。部分型号可通过USB、网络连接,实现远程监控与控制。
Q5 仪器支持与液体工作站等自动化设备对接,在高通量检测中可发挥更大作用。同时,仪器外壳设计紧凑,可适应多种实验台和洁净环境。
检测病毒载量(如HBV、HIV)、肿瘤基因表达水平、遗传病筛查等。
在分子生物学、细胞生物学、发育生物学等领域,用于基因表达分析、miRNA定量等。
检测转基因成分、食品污染物、致病微生物等。
分析水体或土壤中的特定微生物、污染物DNA,辅助环境质量评估。
购买二手Q5荧光定量PCR仪时,应注意以下几个方面:
确认设备原始用途、维护记录以及使用频率,优先选择来自高校或科研机构的仪器,维护相对规范。
要求供应方提供近期设备检测报告,包括温控测试、光学系统测试、Ct值一致性测试等。
检查热盖、加热模块、光学路径是否完好,排除腐蚀、积尘、镜片老化等影响性能的问题。
确认是否包含正版软件及控制权限,有些仪器软件需授权激活或联网注册,需提前核实。
虽然是二手设备,仍建议选择提供质保期和技术支持的渠道,避免后续无法维护或无法替换配件的情况。
每次使用后应清洁样本托盘和热盖,避免残留影响下次实验。
定期校准温控系统与荧光通道,确保数据准确。
软件操作时严格遵守用户手册要求,避免误操作导致系统故障。
对使用频率较高的实验室,建议设立维护日志,记录设备运行状态及异常情况。
与同类荧光定量PCR仪相比(如ABI QuantStudio、Bio-Rad CFX系列等),Q5 具有以下特点:
温控均一性较好,适合对扩增效率敏感的实验;
光路系统设计简单,日常维护相对便捷;
界面操作风格直观,学习成本低;
二手市场存量相对丰富,零部件可替换性强。
但同时也存在一些限制,如部分老型号软件更新不及时,部分功能如高阶熔解曲线分析需额外模块支持等。
二手赛默飞 Q5 荧光定量PCR仪作为一款经典的实时定量扩增检测平台,在科研及检测应用中具有一定实用价值。通过合理选择、规范维护,其仍可满足日常基因定量分析的多数需求。对于预算有限或在构建初期实验室的用户而言,是一项具有性价比的设备选择。