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赛默飞q5荧光定量pcr仪操作规程

2024-12-27

赛默飞 QuantStudio Q5 荧光定量PCR仪操作规程

以下是 赛默飞 QuantStudio Q5 实时荧光定量PCR仪 的标准操作规程(SOP)。此规程涵盖实验前准备、仪器操作、实验设置、运行和数据分析的步骤。


1. 实验前准备

1.1 仪器检查

  1. 确保仪器接通电源并处于正常工作状态。

  2. 打开 QuantStudio Q5 仪器和配套的软件系统。

  3. 检查仪器光学模块是否清洁,无尘无污染。

  4. 确认实验室环境稳定(温度20-25°C,湿度40-60%),避免灰尘干扰。

1.2 反应材料准备

准备 PCR 反应所需试剂和耗材:

  • 样本模板(DNA 或 RNA 转录的 cDNA)。

  • 引物和探针(根据靶标基因设计)。

  • 荧光定量PCR试剂(如SYBR Green Master Mix或TaqMan Master Mix)。

  • 96 孔板或 0.2 mL PCR 管,以及光学透明封板或封膜。

  • 无菌移液器、滤芯吸头。

1.3 标准反应体系

以下是 20 µL 体系的标准配方示例:

成分体积(µL)说明
PCR Master Mix10含有聚合酶、dNTP、Mg²⁺等
上下游引物(10 µM)0.5 各根据靶基因调整浓度
探针(10 µM)或染料0.5如 TaqMan 探针或 SYBR Green
模板 DNA/cDNA1-2根据样本浓度调整体积
无核酸酶水至 20 µL补足总反应体系体积

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