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荧光定量pcr罗氏480使用步骤

2025-05-24

罗氏LightCycler® 480 实时荧光定量PCR系统是实验室中常用的一款中高通量qPCR平台。以下是其标准的使用步骤流程,适用于绝大多数使用SYBR Green或TaqMan探针进行核酸扩增和定量分析的场景:


罗氏LightCycler® 480 使用步骤

一、实验准备

  1. 核酸提取

    • 提取DNA或RNA(如为RNA需进行反转录获得cDNA)

    • 评估浓度与纯度(建议A260/A280介于1.8–2.0)

  2. 试剂准备

    • 根据实验方案选择合适的qPCR试剂(如SYBR Green I Master、Probe Master)

    • 准备引物/探针工作液,确保无气泡、低温避光保存


二、反应体系配置

标准反应体系(以20 µL体积为例):

成分体积(µL)
Master Mix10
Forward Primer (10 µM)0.4
Reverse Primer (10 µM)0.4
探针/染料(如适用)0.2
模板DNA/cDNA1–2
无RNAse水补足至20 µL

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