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罗氏LightCycler® 480荧光定量PCR仪是一种基于实时荧光定量PCR（qPCR）技术的分子生物学检测设备，用于核酸（DNA/RNA）的扩增和定量分析。该仪器采用光学检测系统，可在PCR扩增过程中实时监测荧光信号变化，并通过软件分析计算目标核酸的初始浓度。
LightCycler® 480适用于医学诊断、基础研究、食品安全检测、环境监测等领域，支持多重PCR检测，满足不同实验需求。
温控模块：采用Peltier半导体温控技术，控温范围通常为4°C–99°C，升降温速率可达4.8°C/秒（视具体型号）。
光学检测系统：
激发光源：LED或卤素灯（视型号）。
检测通道：通常支持4–6个荧光通道（如FAM、HEX、ROX、Cy5等），可同时检测多种荧光信号。
样本承载系统：兼容96孔板或384孔板（视型号），部分版本支持多模块并行运行。
触摸屏控制面板（部分型号）：可直接进行基本操作和程序设定。
LightCycler® 480 Software：提供实验设置、数据采集、分析和报告生成功能。
支持绝对定量、相对定量、熔解曲线分析、基因分型等模式。
可导出数据至Excel、PDF等格式。
实时荧光定量PCR（qPCR）通过监测PCR扩增过程中荧光信号的累积来定量目标核酸。LightCycler® 480采用以下两种主要检测方式：
基于探针的检测（如TaqMan探针）：探针与目标序列结合后，在扩增过程中被酶切，释放荧光信号。
基于染料的检测（如SYBR Green）：染料结合双链DNA后发出荧光，但可能受非特异性扩增影响。
仪器在每轮PCR循环后采集荧光信号，生成扩增曲线，并通过阈值循环数（Ct值）计算初始模板量。
样本处理：提取DNA/RNA，测定浓度和纯度（如A260/A280比值）。
试剂准备：
选择合适荧光标记（探针或染料）。
配制PCR反应体系（模板、引物、探针、酶、dNTPs、缓冲液等）。
耗材选择：使用适配的96孔板或384孔板，避免气泡影响信号检测。
开机与初始化：
打开仪器电源，启动软件，进行光学校准（如需要）。
创建实验程序：
设定PCR循环参数（预变性、变性、退火/延伸、循环次数）。
选择荧光检测通道（如FAM、HEX）。
样本排布：
在软件中设定样本位置，标注标准品、待测样本、阴性/阳性对照。
将反应板放入仪器，启动运行。
实时监测扩增曲线和荧光信号。
扩增曲线分析：软件自动计算Ct值，生成标准曲线（绝对定量）或ΔΔCt值（相对定量）。
熔解曲线分析（如使用SYBR Green）：确认扩增特异性。
数据导出：保存或打印结果。
医学诊断：
病原体检测（如新冠病毒、HIV、HBV）。
遗传病筛查（如地中海贫血、囊性纤维化）。
科研实验：
基因表达分析（qRT-PCR）。
SNP分型、突变检测。
食品安全与农业：
转基因成分检测。
食源性致病菌（如沙门氏菌、大肠杆菌）鉴定。
环境监测：
水体或土壤中的微生物检测。
引物/探针设计：确保特异性，避免二聚体或非特异性扩增。
反应体系优化：调整Mg²⁺浓度、退火温度等参数。
分区操作（试剂配制区、样本处理区、扩增区）。
使用UNG酶（尿嘧啶-DNA糖基化酶）防污染体系。
日常清洁：定期用无尘布擦拭样本槽和光学部件。
校准：定期进行光学校准和温度验证。
避免长时间高负荷运行，以延长设备寿命。
| 问题 | 可能原因 | 解决方法 |
|---|---|---|
| 无荧光信号 | 试剂失效、探针降解 | 更换新鲜试剂，检查探针质量 |
| 扩增曲线异常 | 模板降解、PCR抑制物 | 重新提取核酸，优化纯化步骤 |
| 重复性差 | 加样误差、温度不均 | 使用排枪精确加样，检查温控模块 |
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