随着分子生物学技术的发展,实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative PCR,qPCR)已成为基因表达分析、病原检测、突变筛查等领域的重要工具。罗氏公司开发的LightCycler® 96 实时荧光定量PCR仪凭借其四通道检测能力、灵活的实验设置以及友好的软件界面,在科研和临床实验室中得到广泛应用。本文将从仪器构造、工作原理、技术特点、应用场景、操作流程及维护要点等方面,系统介绍该设备的性能与使用方法。
LightCycler® 96 是一款中通量的实时荧光定量PCR仪,可容纳96孔标准板,适合日常分子生物学实验的需求。该系统集成了温控模块、光学检测系统、控制系统与数据分析平台,能够实现快速、准确的qPCR扩增与实时数据采集。
主要构成包括:
温控模块:采用帕尔贴元件(Peltier-based system)进行升降温控制,温度梯度小,确保各孔间的温度均一性。
光学检测系统:搭载四个荧光通道(常用为FAM、HEX、ROX、Cy5),配有独立的激发与检测光路,支持多重检测。
操作界面:通过USB或局域网连接PC,配套LightCycler® 96软件进行程序设置与数据分析。
项目 | 参数 |
---|---|
孔位格式 | 96孔标准PCR板 |
升温速度 | 最快4.4°C/s |
降温速度 | 最快2.2°C/s |
温控精度 | ±0.2°C |
通道数 | 4个荧光通道 |
检测范围 | 10¹–10⁹拷贝 |
动态范围 | 6–8个数量级 |
检测方法 | 光学多通道同步检测 |
支持染料 | SYBR Green I、TaqMan探针等 |
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