罗氏LightCycler® 480 实时荧光定量PCR系统是实验室中常用的一款中高通量qPCR平台。以下是其标准的使用步骤流程,适用于绝大多数使用SYBR Green或TaqMan探针进行核酸扩增和定量分析的场景:
核酸提取
提取DNA或RNA(如为RNA需进行反转录获得cDNA)
评估浓度与纯度(建议A260/A280介于1.8–2.0)
试剂准备
根据实验方案选择合适的qPCR试剂(如SYBR Green I Master、Probe Master)
准备引物/探针工作液,确保无气泡、低温避光保存
标准反应体系(以20 µL体积为例):
成分 | 体积(µL) |
---|---|
Master Mix | 10 |
Forward Primer (10 µM) | 0.4 |
Reverse Primer (10 µM) | 0.4 |
探针/染料(如适用) | 0.2 |
模板DNA/cDNA | 1–2 |
无RNAse水 | 补足至20 µL |
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