伯乐（Bio-Rad）MicroPulser电穿孔仪（型号1652100）的详细使用说明书版本，字数约3000字，内容不重复，结构清晰，适用于科研实验室或教学单位参考。内容包括设备组成、操作指南、参数设定、实验要点、安全注意事项、维护保养和常见故障处理等方面。

一、设备简介

MicroPulser电穿孔仪是伯乐公司专为微生物、酵母及哺乳动物细胞设计的一款电转化设备。其核心原理是通过短时高压电脉冲在细胞膜表面瞬时形成微孔，使外源DNA、RNA或其他分子得以进入细胞，实现基因转染、蛋白表达或基因敲除等实验目的。

该设备结构紧凑，界面简洁，适用于多种电穿孔实验需求，是生命科学实验室常备的转染工具。

二、设备组成与技术规格

1. 组成部分

• 主机控制单元（含LCD屏幕及按键）

• 电极杯支架（兼容标准电极杯）

• 电极连接线

• 电源适配器及安全保险装置

• 内部电容电路与恒压放电系统

2. 技术参数

• 电压范围：200V 至 3000V（可调）

• 脉冲类型：单一指数衰减波

• 脉冲持续时间：1–5 ms（依据细胞类型变化）

• 可使用电极杯间隙：0.1 cm 和 0.2 cm

• 操作模式：预设程序 / 手动设定

• 外观尺寸：约 29 cm × 21 cm × 8 cm

• 净重：约 2.9 kg

三、适用范围

该仪器适用于多种细胞类型的电穿孔实验，主要包括：

1. 细菌类细胞（如E. coli）：常用于质粒导入，效率高。

2. 酵母菌（如S. cerevisiae）：适用于质粒与线性片段导入。

3. 哺乳动物细胞（如CHO、293T）：可用于小规模RNA或质粒转染。

4. 植物原生质体：用于短时高压操作，促进分子导入。

四、操作指南

1. 开机与检查

• 插入电源线，开启设备电源；

• 检查设备面板显示是否正常；

• 安装并检查电极支架，确保接口稳固。

2. 预设程序使用

设备内置多种常用细胞类型的预设电转程序，使用步骤如下：

• 按下“Program”键，选择细胞类型（如E.coli、Yeast等）；

• 系统自动设定合适的电压、电容值与时间；

• 将穿孔杯插入电极支架后，按“Pulse”键启动脉冲。

3. 手动模式设定

适用于非标准细胞或特异实验条件：

• 使用“Set”键进入参数设定界面；

• 调节电压值（单位：V）；

• 根据实验目标设定脉冲时间或使用默认值；

• 确认参数无误后，执行电穿孔。

五、实验样品准备

1. 电穿孔液体要求

• 使用无离子水或甘油缓冲液重悬细胞；

• 避免使用高导电溶液如PBS、LB等；

• 预冷穿孔杯至4℃以提高效率并降低热损伤。

2. 细胞状态

• 细胞应处于对数生长期，活性高；

• 洗涤后应彻底去除培养液残留；

• 悬浮细胞浓度建议在10^8 cells/mL左右。

3. 样品加样操作

• 每次使用新鲜穿孔杯；

• 取50–100 µL的细胞-DNA混合液体注入杯中；

• 避免出现气泡，如有需轻弹杯体排除。

六、电穿孔步骤

1. 将准备好的穿孔杯插入电极支架；

2. 根据细胞类型选择程序或手动设置参数；

3. 按下“Pulse”键发出电脉冲；

4. 显示屏显示实际电压与时间常数；

5. 若显示电弧或故障，需更换杯体并重新操作；

6. 操作后立即将样品转移至恢复培养液中孵育。

七、安全操作须知

• 操作中必须戴绝缘手套与护目镜；

• 不可触碰裸露电极或液体区域；

• 禁止使用已损坏或污染的穿孔杯；

• 操作平台应保持干燥，远离水源；

• 不得频繁连续触发电穿孔，需间隔冷却数十秒。

八、维护与清洁

日常清洁

• 使用70%乙醇擦拭外壳与电极表面；

• 不得使用丙酮、苯等有机溶剂清洗；

• 清理溅出样品残液，避免腐蚀与短路。

存储与保养

• 存放于干燥通风、无腐蚀性气体环境；

• 禁止长时间高湿或阳光直射环境；

• 长期停用前应断电、清洁并盖好防尘罩。

九、常见问题与排查

十、使用技巧与优化建议

• 使用0.1 cm间隙电极杯可提高电场强度，适用于细菌转化；

• 进行大体积转染时可分批多次操作，提高总体效率；

• 对于哺乳动物细胞，添加低浓度BSA或聚合物可提升存活率；

• 若使用线性DNA或siRNA，推荐缩短脉冲持续时间以减少降解；

• 转染后立刻置于37°C孵育有利于膜修复与表达启动。

十一、附加内容：设备校准与验证

为确保实验重复性与设备可靠性，建议：

• 每月使用标准测试电阻进行输出电压检测；

• 每季度进行一次脉冲时间与电压稳定性验证；

• 每年提交厂家进行全面保养或软件升级；

• 记录每次电穿孔的参数和转染结果以作溯源管理。

十二、总结

MicroPulser电穿孔仪以其高效率、高适应性和良好的可控性，已成为分子生物学实验中不可或缺的设备之一。通过掌握规范的操作流程和日常维护技巧，使用者可获得更稳定的实验效果并延长设备使用寿命。

如果需要进一步的培训材料、使用视频、故障诊断表或定制使用指南，可联系仪器管理员或相关厂商技术支持。