伯乐电转仪使用说明书（通用版）

一、设备概述

伯乐（Bio-Rad）电转仪是一种专业用于蛋白质转膜的实验设备，广泛应用于Western Blot实验中，将SDS-PAGE分离的蛋白从凝胶转移到膜上（如PVDF或NC膜），为后续抗体杂交检测做准备。该仪器依靠电场作用完成蛋白迁移，可实现高效、清晰的蛋白条带转移。

伯乐电转系统根据应用场景分为多个版本，包括传统湿转系统（如Mini Trans-Blot® Cell）和快速转膜系统（如Trans-Blot® Turbo™），满足不同用户在转膜速度、精度、通量和操作便捷性上的需求。

二、设备组成与原理

1. 主要组件

• 主机电源模块：设定电压、电流和运行时间，带有液晶显示。

• 转膜模块：包括电极板、支撑夹层、转膜卡夹、冷却系统等。

• 电极接口和导线：红黑两极对应阳极和阴极。

• 转膜耗材：

• 聚丙烯酰胺凝胶；

• 膜（PVDF或NC）；

• 滤纸（Whatman）；

• 转膜缓冲液。

2. 工作原理

当电流通过转膜夹层时，蛋白质在电场作用下从凝胶迁移到膜上（阴极→阳极方向）。转移过程保持蛋白构象稳定，且尽量避免蛋白扩散或降解。成功转膜的关键是：

• 合理设置电压、电流；

• 确保夹层结构无气泡；

• 缓冲液电导性适中、温度控制良好。

三、转膜操作流程（湿转法）

第一步：转膜前准备

1. 凝胶处理：

• 电泳完成后取出凝胶，切除泳道不需要区域；

• 剪裁至合适尺寸，保留蛋白条带区域。

2. 膜处理：

• NC膜可直接使用；

• PVDF膜需用甲醇活化1分钟后转入水→缓冲液中平衡；

• 剪裁大小略大于凝胶，确保完全覆盖。

3. 缓冲液配制：

• 常用Tris-Glycine缓冲液，含20%甲醇；

• 配好后低温保存，使用时冷却至4°C。

4. 滤纸和垫层准备：

• 滤纸和海绵垫剪裁与凝胶大小一致；

• 浸泡在冷缓冲液中至少5分钟，充分润湿。

第二步：夹层装配

装配顺序如下（自下而上）：

1. 黑色电极（阴极）侧：

• 海绵垫

• 滤纸

• 凝胶

• 膜（PVDF/NC）

• 滤纸

• 海绵垫

2. 每层铺放后，用玻棒轻轻滚压去除气泡，尤其是凝胶-膜之间。

3. 固定夹具夹紧后插入电泳槽，保证方向正确：

• 黑色（阴极）连接凝胶面；

• 红色（阳极）连接膜面；

• 电流方向为“黑进红出”。

第三步：电泳转膜参数设置

根据蛋白大小和胶厚度设置不同参数：

温馨提示：电流不应超过350 mA，确保缓冲液不升温过快。

第四步：运行与转膜后处理

1. 启动电源，监控电压、电流及温度。

2. 完成后关闭电源，取出膜并进行短暂染色（如Ponceau S）确认蛋白转移效果。

3. 用纯水冲洗去除染色剂，晾干或封闭，准备后续抗体孵育步骤。

四、快速转膜操作（Trans-Blot® Turbo™）

该型号主打5–10分钟快速转膜，可大幅提高效率，适合高通量或紧急实验需求。

操作简要流程：

1. 使用专用Turbo转膜包（包括预制凝胶-膜夹层）；

2. 插入电转模块后，主机自动识别程序；

3. 启动后自动完成电压调节与运行；

4. 转膜完成后立即可用于免疫检测。

五、注意事项与技巧

1. 膜的选用

• PVDF膜：

• 机械强度高、蛋白结合能力强；

• 需甲醇预处理；

• 适合后续长期保存或剥离。

• NC膜：

• 操作简便，价格低；

• 容易脆裂、不适合高温剥离。

2. 防止“空带”或条带失真

• 膜与凝胶必须紧密贴合；

• 转膜前去除所有气泡；

• 缓冲液要充分预冷，防止蛋白变性。

3. 提高转膜效率技巧

• 可将膜朝电场方向略倾斜放置，促进定向迁移；

• 对大分子蛋白使用SDS加入转膜缓冲液，增强释放；

• 多重转膜实验需更换新膜避免污染。

六、常见问题与排查

七、设备维护与保养

• 使用后及时清洗电泳槽和电极板；

• 定期擦拭主机外壳，保持通风干燥；

• 存储时将电源线和电极线松弛收好；

• 若长期不使用，应断电保存，防止电容老化。

八、实验拓展应用

1. 双向转膜

将膜分段与两个凝胶结合，用于同批样本不同抗体染色，提高效率。

2. 条带对齐识别

转膜后预染蛋白或Ponceau S染色可提前判断条带对应泳道，减少后期误识。

3. 定量蛋白转膜

利用蛋白标准曲线与膜图像系统联用，实现半定量分析。

九、总结

伯乐电转仪以其精密性、兼容性与高稳定性在蛋白转膜实验中发挥着至关重要的作用。通过标准操作流程、合理参数设置与细致日常维护，实验人员可以获得高质量、重复性强的转膜结果。