以下是 赛默飞 QuantStudio Q5 实时荧光定量PCR仪 的标准操作规程(SOP)。此规程涵盖实验前准备、仪器操作、实验设置、运行和数据分析的步骤。
确保仪器接通电源并处于正常工作状态。
打开 QuantStudio Q5 仪器和配套的软件系统。
检查仪器光学模块是否清洁,无尘无污染。
确认实验室环境稳定(温度20-25°C,湿度40-60%),避免灰尘干扰。
准备 PCR 反应所需试剂和耗材:
样本模板(DNA 或 RNA 转录的 cDNA)。
引物和探针(根据靶标基因设计)。
荧光定量PCR试剂(如SYBR Green Master Mix或TaqMan Master Mix)。
96 孔板或 0.2 mL PCR 管,以及光学透明封板或封膜。
无菌移液器、滤芯吸头。
以下是 20 µL 体系的标准配方示例:
成分 | 体积(µL) | 说明 |
---|---|---|
PCR Master Mix | 10 | 含有聚合酶、dNTP、Mg²⁺等 |
上下游引物(10 µM) | 0.5 各 | 根据靶基因调整浓度 |
探针(10 µM)或染料 | 0.5 | 如 TaqMan 探针或 SYBR Green |
模板 DNA/cDNA | 1-2 | 根据样本浓度调整体积 |
无核酸酶水 | 至 20 µL | 补足总反应体系体积 |
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