一、概述

赛默飞（Thermo Scientific）Multiskan EX 是一款经典的多功能酶标仪，广泛应用于生命科学、医学检验、药物研发和食品安全等领域。它能够快速、准确地对酶标板中多个样品的光密度（OD 值）进行测量，并配合终点法、动力学法、多波长测定等模式实现不同类型的实验检测。

一个完整的 Multiskan EX 实验流程包括前期准备、仪器启动、检测方法设置、样品测量、数据分析和结果输出等环节。严格遵循规范的实验流程，能够提高实验的准确性和重复性，同时延长仪器的使用寿命。

二、实验前准备

1. 环境与条件检查

• 实验室温度保持在 18–28℃，湿度 40–60%RH。

• 避免阳光直射、强气流和高粉尘环境。

• 确保仪器放置平稳，背面距墙 ≥10 cm 以利于散热。

2. 仪器状态检查

• 确认仪器外观无损伤、无灰尘积聚。

• 检查电源线与数据连接线完好，接地正常。

• 确认光源、滤光片、板托架等部件状态良好。

3. 试剂与耗材准备

• 根据实验方案准备显色底物、终止液、标准品和样品。

• 使用高质量 96 孔酶标板（平底、圆底或 U 型底按实验需求选择）。

• 准备移液器及配套枪头，确保准确移液。

4. 样品预处理

• 按实验方案将样品和试剂加入酶标板对应孔位。

• 如为终点法实验，需在规定时间加入终止液，使颜色反应稳定。

• 检查孔内液面高度一致，避免气泡影响光路。

三、仪器启动与预热

1. 打开仪器电源，启动前预热 15–20 分钟，以确保光源稳定。

2. 连接配套软件（如 Ascent），确认仪器与电脑通信正常。

3. 检查所需滤光片是否已安装在对应位置。

四、实验方法设置

1. 新建检测方法

• 在软件中选择“新建方法”，输入方法名称和描述。

2. 波长选择

• 按实验需求选择单波长或双波长检测模式：

• 单波长：常用于终点法 ELISA（如 450 nm）。

• 双波长：测量主波长与参考波长（如 450 nm/620 nm）以扣除背景。

3. 检测模式

• 终点法：反应完成后一次性读取。

• 动力学法：记录反应过程的多个时间点。

4. 板型与孔位定义

• 在软件中设置酶标板布局，标明空白孔、标准孔、样品孔和对照孔。

5. 读取参数

• 选择全板扫描或部分扫描。

• 设置读取速度（快速、中速、慢速）。

6. 保存方法

• 将设置保存为方法文件，方便后续重复使用。

五、样品检测流程

1. 装载酶标板

• 将准备好的酶标板放入板托，确保放置方向与软件设置一致。

• 检查板底干净无污渍，避免影响光路。

2. 启动检测

• 点击软件中的“运行”按钮，仪器自动读取各孔 OD 值。

• 检测过程中，软件实时显示数据。

3. 检测结束

• 仪器完成全板扫描后，自动将数据保存到计算机。

六、数据处理与分析

1. 数据预处理

• 自动或手动扣除空白孔 OD 值。

• 计算重复孔的平均值与标准差，剔除异常值。

2. 定量分析

• 使用标准孔数据生成标准曲线（线性回归、四参数拟合等）。

• 根据曲线计算样品浓度。

3. 定性分析

• 对比样品 OD 值与临界值（Cut-off）判断阴阳性。

4. 数据导出

• 将分析结果导出为 Excel、PDF 等格式，或直接打印报告。

七、结果输出与报告生成

1. 报告内容

• 实验方法参数。

• 酶标板布局示意图。

• 原始 OD 数据表。

• 计算结果及统计分析。

• 标准曲线及拟合参数。

2. 输出方式

• 软件内直接生成并保存报告文件。

• 网络或移动存储设备传输。

• 打印纸质报告存档。

八、常见问题及处理

1. OD 值波动大

• 检查移液是否准确，孔间液面高度是否一致。

• 检查酶标板底部是否清洁，有无气泡。

2. 光源不稳定

• 检查灯泡寿命，必要时更换。

• 确保预热时间充足。

3. 通信故障

• 检查数据线连接与端口设置。

• 重新启动软件和仪器。

4. 标准曲线异常

• 检查标准品配制与稀释步骤。

• 确认反应时间与终止步骤一致。

九、操作注意事项

1. 时间控制

• 对于终点法实验，需确保所有孔的反应终止时间一致。

2. 波长选择

• 波长应与显色底物的吸收峰匹配。

3. 避免污染

• 实验过程中佩戴手套，避免指纹或试剂污染酶标板底部。

4. 维护与清洁

• 每日检测后清洁板托与外壳。

• 定期校准光学系统，保持精度。

十、结语

赛默飞 Multiskan EX 的实验流程设计合理，操作简便，适合多种检测模式。熟悉并严格执行完整的实验步骤，可以大幅提高检测结果的准确性和实验的可重复性。通过结合标准化的样品制备、科学的时间管理与数据分析方法，Multiskan EX 能够在科研与应用检测中发挥出稳定可靠的性能。