一、概述

赛默飞 Multiskan SkyHigh 是一款全波长酶标仪，覆盖 200–1000 nm 的宽波长范围，能够满足从紫外到近红外的多种检测需求。其中，多波长检测（Multi-Wavelength Reading） 是其核心优势之一。
多波长检测不仅能在一次实验中采集多个波长下的吸光度数据，还可用于样品背景扣除、双波长比值分析、光谱扫描等复杂分析任务。这一功能对于提高检测灵敏度、减少干扰、提升定量准确性具有重要意义。

二、多波长检测的原理

多波长检测基于光学系统在不同波长下对样品吸光度的测量能力。

• 样品在不同波长下的吸收特性由其分子结构和显色体系决定。

• 在检测时，光源发出全波段光，通过单色器或滤光片选定特定波长的光束照射样品，探测器记录透过光强度，并计算吸光度。

• 多波长检测模式会在同一孔位按设定的波长顺序进行多次测量，从而得到多个波长的数据。

常见模式：

1. 双波长检测
   用一个主波长检测信号，另一个参考波长用于背景扣除。

2. 多波长组合检测
   在 3–6 个波长下采集信号，用于全光谱分析或复杂比值计算。

3. 光谱扫描
   按一定步长扫描整个波长区间，获得连续光谱曲线。

三、Multiskan SkyHigh 多波长检测的技术特点

1. 全波长覆盖
   200–1000 nm 的检测范围可满足核酸、蛋白、酶反应及细胞活力等不同类型实验。

2. 快速波长切换
   采用高性能光学切换模块，实现毫秒级波长切换，减少检测时间。

3. 高分辨率单色器
   波长分辨率可达到 1 nm，确保光谱分析的精确度。

4. 低漂移光源
   长寿命氙灯或高稳定性 LED 保证多波长测量中光强一致性。

5. 自动背景校正
   软件可根据参考波长信号自动扣除背景，减少浑浊、光散射对结果的影响。

四、多波长检测的优势

1. 提高准确性
   通过参考波长校正，减少非特异性吸收带来的误差。

2. 增强灵敏度
   多波长组合分析可在复杂体系中更灵敏地识别目标信号。

3. 适配多种实验体系
   一次实验即可满足不同分析指标的需求，节省时间与样品。

4. 支持光谱分析
   可生成样品的全光谱曲线，辅助分析分子特性。

五、常见应用场景

1. 酶动力学研究
   通过在底物和产物吸收峰波长下同步检测，实时监控反应过程。

2. 蛋白质定量
   在 280 nm 测定蛋白吸收峰，同时在参考波长处扣除背景，提高定量精度。

3. 核酸纯度检测
   260/280 比值用于评估 DNA 或 RNA 纯度，260/230 比值用于判断有机污染。

4. 细胞活力测定
   多波长采集可同时记录不同显色剂的吸收峰，进行多指标分析。

5. 免疫检测（ELISA）
   主波长检测显色信号，参考波长用于扣除板材背景。

六、操作流程（以 SkyHigh 软件为例）

1. 选择检测模式
   在软件中新建实验，选择“多波长检测”或“光谱扫描”模式。

2. 设定波长参数

• 输入多个检测波长（如 450 nm 主波长，620 nm 参考波长）

• 可设定扫描范围与步长（光谱扫描模式）

3. 设定读数方式
   可选择端点法或动力学检测，并在每个波长下设定读数时间与次数。

4. 加载样品板
   按板孔布局将样品、对照、标准曲线等加到相应孔位。

5. 开始检测
   仪器按设定顺序在每个波长下完成测量，并将结果存储在同一数据文件中。

6. 数据导出与分析
   软件可自动计算比值、扣除背景并生成曲线图。

七、数据处理与分析方法

1. 背景扣除
   使用参考波长数据消除板材、缓冲液等非特异吸收影响。

2. 比值计算
   常用于核酸纯度（260/280）、酶活性比值分析等。

3. 曲线拟合
   多波长数据可分别拟合标准曲线，用于多指标定量。

4. 光谱比较
   比较不同样品的吸收光谱，分析结构或浓度差异。

八、影响多波长检测结果的因素

1. 光源稳定性
   波长切换过程中的光强波动会影响结果一致性。

2. 样品质量
   浑浊度、气泡、沉淀会导致光散射，影响多波长数据准确性。

3. 波长选择
   不恰当的波长组合可能降低信噪比。

4. 板材选择
   微孔板在不同波长下的透光率不同，应根据实验波长选择合适板型。

九、优化多波长检测的策略

1. 选择最佳波长组合
   根据目标分子的吸收峰和背景特性选择波长，提高信噪比。

2. 减少机械切换时间
   通过波长排序优化，缩短检测周期。

3. 优化样品制备
   避免气泡和悬浮颗粒，确保光路稳定。

4. 使用高透光率板材
   对于紫外检测，应选用石英或高透塑料材质。

5. 软件数据处理
   利用自动背景扣除和多波长比值计算功能，减少人工误差。

十、未来发展方向

随着光学技术和数据处理算法的进步，未来的多波长检测将更加快速、精准并具备更多智能化功能，例如：

• 实时波长优化算法，根据样品特性自动选择最佳波长组合。

• 多波长并行检测模块，缩短检测时间。

• 云端数据分析，支持大规模多波长数据的自动化解读与共享。

十一、总结

赛默飞 Multiskan SkyHigh 的多波长检测功能在科研、医学检验、药物研发等领域具有广泛应用价值。它通过在一次实验中采集多波长数据，不仅提升了检测精度和灵敏度，还拓展了分析维度。无论是核酸纯度检测、蛋白质定量，还是复杂的酶动力学和多指标分析，多波长检测都为实验提供了更全面、更可靠的数据支持。