一、概述

赛默飞（Thermo Scientific）Multiskan Ascent 酶标仪是一款多功能、精密光学检测设备，主要用于对酶标板内的样品进行光密度（OD）测量。光路系统是其核心部件之一，直接影响检测结果的准确性与重复性。
在长期使用过程中，光源老化、滤光片透光率变化、光路组件位置偏移或灰尘污染等因素都会影响光学系统的性能。定期对光路进行校准，可以确保仪器输出的吸光度数据真实、稳定、可重复。

光路校准不仅是质量管理体系（如 ISO、GLP、GMP）要求的一部分，也是保障科研与检测结果可靠性的关键环节。

二、光路系统原理

Multiskan Ascent 的光路系统主要包括以下部分：

1. 光源：通常采用卤素灯或氙灯，提供稳定的光谱输出。

2. 滤光片：通过选择性透过特定波长的光，实现不同显色反应的检测。

3. 光路引导系统：由透镜、反射镜组成，确保光线准确聚焦到样品孔。

4. 样品位置：96 孔酶标板的每个孔是光路检测的终端位置。

5. 光电检测器：通常是光电二极管或光电倍增管，将透过样品的光信号转换为电信号。

6. 信号处理模块：将光信号转化为吸光度（OD）值并传输给软件进行处理。

光路校准的实质是通过已知透光率的标准器件或溶液，对比实际测量值与标准值，调整或修正系统参数，使其恢复到设定精度范围内。

三、光路校准的必要性

1. 保证检测精度
   光路校准能修正由于光源衰减、滤光片老化等引起的光强变化，确保 OD 值的准确性。

2. 提升重复性与可比性
   定期校准确保同一台设备在不同时间、不同批次实验中的结果一致，便于数据对比。

3. 满足质量体系要求
   符合 ISO 9001、ISO 13485、GLP、GMP 等对检测设备的定期校准要求。

4. 延长设备寿命
   校准过程通常伴随光学系统清洁与检查，可预防光路污染或部件损坏。

四、校准准备工作

1. 环境准备

• 温度：18–28℃，湿度：40–60%RH。

• 避免直射阳光、强气流、强磁干扰。

• 仪器放置稳固，避免振动。

2. 仪器检查

• 确认电源与通讯线连接正常。

• 检查板托与光学通道无明显灰尘、污渍。

• 确认所需波长的滤光片已安装并完好。

3. 校准耗材与工具

• 厂家提供的光路校准板（Calibration Plate）或透光标准片。

• 清洁用无尘布和无水乙醇（或光学清洁液）。

• 如需波长校准，准备特定标准溶液（如重铬酸钾）。

4. 软件与方法准备

• 打开配套的 Ascent 软件。

• 调用“光路校准”功能模块，或新建校准方法。

五、光路校准的具体步骤

以下为标准终点法校准流程示例：

1. 开机预热

• 开机并预热 15–20 分钟，使光源输出稳定。

2. 进入校准程序

• 在软件主菜单中选择 “工具/维护” → “光路校准”。

• 选择需要校准的波长或全部波长。

3. 放置标准板

• 将厂家提供的光路校准板放入板托，确保方向正确。

• 校准板上各孔透光率已知，用于比较测量值与理论值。

4. 运行校准

• 点击“开始”，仪器依次读取校准板各孔。

• 软件自动计算实际透光率与标准值的偏差。

5. 调整与修正

• 若偏差在允许范围内（如 ±0.005 Abs 或 ±1%），则记录为合格。

• 若偏差超限，软件会提示修正，必要时需人工调整光源位置、滤光片角度或更换老化部件。

6. 保存校准结果

• 保存校准记录，并生成校准报告以备质量审核。

六、数据判定与记录

1. 判定标准

• 吸光度差异 ≤ 0.005 Abs（或相对误差 ≤ 1%）为合格。

• 波长准确度偏差 ≤ ±2 nm（如进行波长校准）。

2. 记录内容

• 校准日期与时间。

• 操作人员签名。

• 校准板批次与有效期。

• 各波长测量值与偏差。

• 调整或更换部件的记录。

七、常见问题与排查

1. 校准失败（偏差大）

• 检查校准板是否清洁。

• 检查滤光片是否老化或污染。

• 检查光源亮度与位置。

2. 个别波长不合格

• 可能是对应波长滤光片性能下降。

• 需要更换或重新安装滤光片。

3. 重复性差

• 检查板托定位精度。

• 确认环境光干扰是否屏蔽。

八、光路维护与延长寿命建议

1. 定期清洁

• 每季度用无尘布和无水乙醇擦拭板托与光路入口。

• 禁止使用含有腐蚀性或颗粒的清洁剂。

2. 滤光片保养

• 避免用手直接接触滤光片表面。

• 存放在干燥、防尘环境，避免潮湿导致镀膜损坏。

3. 光源更换

• 按厂家建议的工作小时数更换光源。

• 更换时避免触摸灯泡玻璃部分，防止指纹造成局部过热。

4. 防尘与防震

• 使用防尘罩，避免空气中的颗粒进入光路。

• 避免移动或撞击仪器，以免光学部件错位。

九、质量管理与合规性

在符合 GLP、GMP 或 ISO 体系的实验室中，光路校准通常需：

• 制定年度校准计划。

• 保留完整的校准记录与原始数据。

• 在设备台账中记录每次校准与维护信息。

• 接受第三方计量机构定期检定（如需要）。

十、结语

光路校准是赛默飞 Multiskan Ascent 酶标仪长期稳定运行的重要保障环节。通过规范的校准流程，不仅能确保检测数据的准确性和可追溯性，还能在早期发现光学系统潜在故障，避免实验结果受到影响。对于高频率使用的实验室，建议每季度或每 500 小时运行后进行一次校准，并在重大实验前额外执行光路检测。