赛默飞洗板机 Wellwash 1x12 试剂使用详解

一、概述

在 ELISA 实验及其他基于微孔板的检测中，洗涤步骤对实验结果的准确性具有决定性作用。赛默飞 Wellwash 1x12 洗板机通过自动化操作提升了洗涤效率和一致性，而正确使用清洗试剂则是保障实验成功的关键。不同类型的试剂在洗板过程中承担着去除未结合物、降低背景、保持目标分子稳定的作用。因此，实验人员必须系统掌握试剂的选择、配制与使用方法，才能在实际应用中得到最佳效果。

二、常用洗板试剂类型

1. 缓冲盐溶液类

• PBS（磷酸盐缓冲盐溶液）：最常用的基础清洗液，维持孔内离子强度和 pH 稳定。

• TBS（Tris 缓冲盐溶液）：在部分实验中可替代 PBS，适合对磷酸敏感的体系。

2. 添加表面活性剂的缓冲液

• PBS-T 或 TBS-T（含 Tween-20）：常见浓度为 0.05% Tween-20，可减少非特异性结合，提高洗涤彻底性。

• 对于背景较高的体系，可以适度提高至 0.1%，但需避免损伤结合物。

3. 去污剂与特殊添加剂

• 低浓度 Triton X-100 或 NP-40：用于细胞相关实验，帮助去除细胞碎片。

• 乙醇或甲醇稀释液：在特殊检测中用于去除疏水性物质，但不常规使用。

4. 去离子水或超纯水

• 用于管路冲洗和终末清洁，避免残留盐分结晶。

三、试剂配制原则

1. 基础缓冲液的配制

• PBS 配方：NaCl、KCl、Na2HPO4、KH2PO4，pH 7.2-7.4。

• TBS 配方：Tris、NaCl，pH 7.4-8.0。

2. 表面活性剂的添加

• Tween-20 应先用少量缓冲液稀释再加入母液，避免直接倒入引起漂浮泡沫。

• 建议现配现用，如需长期存放，应低温保存，避免微生物污染。

3. 过滤与灭菌

• 对于敏感实验，配制完成后可通过 0.22 μm 滤膜过滤，去除颗粒和微生物。

• 并非所有实验都需灭菌，但至少保证试剂无可见悬浮物。

4. 使用前检查

• 确认试剂透明无沉淀，若发现结晶，应重新配制。

• 检查 pH 是否符合要求，不合适的缓冲液可能影响抗原抗体结合。

四、试剂在 Wellwash 1x12 中的使用技巧

1. 装液前的准备

• 清洗瓶应清洁干净，避免残留旧液。

• 装液量应根据实验数量计算，避免过多浪费。

2. 液体排气与系统预冲洗

• 新换试剂后应运行“Prime”或排气程序，让试剂充满管路，避免空气泡干扰喷液。

• 可先用去离子水冲洗一遍，再换成新配试剂。

3. 洗涤过程中的控制

• 进液速度：中等速度可兼顾洗涤彻底性与避免剧烈冲击。

• 浸泡时间：对于高背景实验，浸泡 30-60 秒可增强去除效果。

• 清洗次数：ELISA 常设为 3-5 次；若孔内残液多，可适度增加。

4. 特殊实验中的调整

• 细胞相关实验应避免使用表面活性剂过高的洗液，以免破坏细胞层。

• 对于蛋白敏感实验，可用 PBS 替代含 Tween 的缓冲液，降低干扰。

五、废液管理与安全注意事项

1. 废液处理

• 洗涤废液中可能含有生物样品或化学物质，必须收集至废液瓶中，统一处理。

• 不可随意倾倒至下水道，应根据实验室生物安全规范分类处理。

2. 使用安全

• 配制和倾倒试剂时应佩戴手套和护目镜，避免接触皮肤或眼睛。

• 若不慎接触，应立即用大量清水冲洗。

六、常见问题与解决方案

1. 喷液不均匀

• 检查试剂是否含有气泡，重新排气。

• 检查液体粘度是否过高，若必要可适度稀释。

2. 管路堵塞

• 试剂未过滤可能带入颗粒，应定期用去离子水冲洗管路。

• 若堵塞严重，可拆下针头进行清洁。

3. 洗后残液明显

• 检查吸液针高度设置，必要时校准。

• 增加吸液延时，确保液滴完全被吸出。

4. 背景信号偏高

• 试剂浓度不当或洗涤不彻底，需调整 Tween-20 浓度或增加清洗次数。

• 检查试剂是否受污染，必要时重新配制。

七、优化实验效果的试剂使用策略

1. 合理搭配缓冲液

• ELISA 常规选择 PBS-T；若背景高，可改用 TBS-T。

• 针对某些特殊抗体，需根据说明书指定缓冲液。

2. 动态调整浓度

• Tween-20 过低洗不净，过高可能破坏结合，建议逐步优化。

• 可在预实验中设置不同浓度梯度，比较信号强弱和背景水平。

3. 结合实验周期管理

• 长期大量实验建议集中配制母液，按需稀释使用，保证一致性。

• 建立配制与使用记录，便于追踪异常结果原因。

八、试剂与设备维护结合

1. 每日维护

• 实验结束后用去离子水冲洗管路，避免试剂残留结晶。

• 废液瓶清洗干净，防止细菌滋生。

2. 定期深度清洁

• 每周至少一次用 70% 酒精清洗管路，防止生物污染。

• 每月检查过滤装置，避免试剂杂质进入。

3. 停机存放

• 长时间停机时，应排空所有试剂，用去离子水冲洗干净。

• 最后注入少量无害保存液，防止管路干裂。

九、案例与实用经验总结

1. ELISA 背景过高：将 PBS-T 调整为 TBS-T 并延长浸泡时间，背景下降明显。

2. 细胞洗板损伤严重：将含 Tween-20 的洗液换为 PBS，降低冲刷强度，细胞层保持完整。

3. 管路结晶堵塞：发现是因 PBS 蒸发后盐析，改用去离子水冲洗收尾，堵塞问题明显减少。

4. 批量实验效率提升：提前配好工作液，集中清洗多板，减少试剂更换次数，提高效率。

十、总结

赛默飞 Wellwash 1x12 洗板机的高效运行不仅依赖于机械性能，更取决于试剂的科学使用。掌握试剂的选择、配制、浓度调整和日常维护方法，可以显著提升实验数据的准确性和可重复性。通过合理规划洗涤方案、科学处理废液、结合设备保养，实验人员能够在 ELISA 和其他检测工作中获得稳定可靠的结果。