赛默飞分光光度计BioMate 160实验设置参数详解

一、设备概述

赛默飞BioMate 160分光光度计是一款实验室常用的紫外-可见分光光度计，广泛应用于分子生物学、分析化学、制药和食品检测等领域。该仪器采用先进的光学系统与高灵敏度检测器，能够在190~1100 nm波长范围内进行准确测量。其核心特点在于操作简便、测量重复性高、软件功能完善，尤其适合需要进行多参数检测的实验室。

分光光度计的核心任务是通过测定样品对特定波长光的吸收程度来推断其浓度或结构特征。BioMate 160配备的光源为氘灯（覆盖紫外区）和钨灯（覆盖可见区），通过自动切换实现全波段扫描。其配置的软件允许使用者快速设定实验参数，完成定量、定性或动力学实验。

二、实验前的准备与校准

1. 电源与预热

在实验前，确保设备接通稳定电源。开机后需预热15-20分钟，使光源达到稳定状态，避免因灯丝电流波动导致的基线漂移。

2. 比色皿检查

BioMate 160支持1 cm、5 cm和10 cm光程比色皿。常规实验中多采用1 cm标准石英比色皿，需提前检查其是否干净透明，无划痕与气泡。

3. 校正与零点调整

在正式实验前，需以空气或纯溶剂为空白参比进行零点校正。校正步骤包括：

• 选择实验所需波长

• 插入装有溶剂的比色皿作为参比

• 进行自动调零，确保透射率为100%或吸光度为0

三、关键实验参数设置

BioMate 160的参数设置通常通过触控面板或配套软件完成，主要包括以下几类：

1. 波长设定

• 固定波长模式：输入单一波长（如260 nm或280 nm）进行核酸或蛋白浓度测定。

• 扫描模式：设定起始与终止波长（如200~400 nm），以及扫描间隔（1 nm、2 nm等），获取完整光谱图。

• 多波长模式：一次设定多个波长（如260 nm和280 nm），常用于核酸纯度判定。

2. 测量模式

• 吸光度（Absorbance）：最常用模式，结果以A值显示。

• 透过率（%T）：适合检测透明度或透光率。

• 浓度（Concentration）：可通过标准曲线法或输入摩尔消光系数进行定量。

3. 光谱带宽

BioMate 160提供1 nm或2 nm带宽选择。1 nm适用于精细结构研究，2 nm适合常规检测，可提升信噪比。

4. 采样速度

扫描速率可设为慢速、中速、快速。慢速扫描可获得更高分辨率，适合精确研究；快速扫描适合高通量检测。

5. 光程补偿

在使用非标准比色皿时，可以在参数中输入光程，仪器会自动进行吸光度修正。

四、常用实验设置举例

1. 核酸浓度与纯度检测

• 波长设置：260 nm、280 nm、230 nm

• 测量模式：吸光度模式，多波长测定

• 参数说明：A260用于核酸浓度计算；A260/A280比值用于判定蛋白污染；A260/A230比值用于检测盐或有机物残留。

2. 蛋白浓度检测（Bradford或BCA法）

• 波长设置：595 nm（Bradford）、562 nm（BCA）

• 测量模式：浓度模式，通过标准曲线计算未知样品浓度

• 注意事项：需提前制备标准曲线，并保证显色反应充分完成。

3. 酶动力学测定

• 波长设置：根据底物或产物的最大吸收波长设定，如340 nm检测NADH

• 测量模式：时间扫描模式，记录一定时间内吸光度变化

• 参数设置：采样间隔可设定为5~10秒，测量总时长可达数分钟至数小时。

4. 全波段扫描

• 起始波长：200 nm

• 终止波长：800 nm

• 扫描间隔：1 nm

• 模式：吸光度模式

• 应用：用于分析化合物的吸收峰位置，进行结构或纯度判定。

五、数据采集与结果处理

BioMate 160的实验结果可通过多种方式输出：

1. 仪器显示屏直接读取：适合快速实验。

2. 内置存储或外接U盘导出：常用于保存大批量数据。

3. 配套软件数据分析：可实现峰值分析、基线校正、曲线拟合、动力学参数计算等功能。

数据处理时需注意：

• 多次测定平均值可提高结果可靠性

• 需要扣除空白样本背景值

• 建议绘制标准曲线并验证线性范围

六、实验注意事项

1. 比色皿放置方向统一：避免因光程差异导致结果偏差。

2. 样品体积充足：液面需高于光路高度，确保光束完全穿过样品。

3. 避免气泡干扰：操作前轻轻敲击比色皿，排除气泡。

4. 实验环境稳定：避免强光直射或温度剧烈波动，减少基线漂移。

5. 定期维护：光源寿命有限，需定期检查并更换氘灯或钨灯；比色皿应及时清洗，避免残留物沉积。

七、实验优化与高级设置

1. 灵敏度优化
   在低浓度样品检测时，应选择窄带宽（1 nm）和慢速扫描，以减少噪音并提升分辨率。

2. 线性范围验证
   在建立标准曲线时，需验证不同浓度区间的线性关系，确保定量结果准确。

3. 温控配合
   对于温度敏感的反应体系，可配合外部水浴或温控模块使用，确保酶动力学数据的可靠性。

4. 自动化扩展
   BioMate 160可与部分自动进样系统对接，实现批量样品的快速检测，适合高通量实验。

八、总结

赛默飞分光光度计BioMate 160凭借其稳定的光学性能、灵活的参数设置和完善的数据处理功能，成为实验室分析中的重要工具。实验设置参数涵盖波长选择、测量模式、光谱带宽、扫描速度、光程修正等多个方面，不同的实验类型对应不同的参数设定。正确的参数选择与优化，能够显著提升实验结果的准确性与重复性。

通过科学的设置与规范化的操作，BioMate 160不仅能完成常规的核酸与蛋白定量分析，还能应用于酶动力学、药物研发、材料检测等更广泛的研究领域，为科研人员提供可靠的数据支持。