赛默飞分光光度计BioMate 160样品要求

一、引言

分光光度法是一种常用的分析检测手段，其准确性不仅依赖于仪器性能，还与样品的性质、处理方式和操作规范密切相关。赛默飞分光光度计BioMate 160作为一款高性能紫外-可见光分光光度计，广泛应用于生命科学、医学、环境及食品检测中。为了确保实验结果的可靠性，研究者在使用BioMate 160前必须严格遵循样品制备与检测要求。本文将对BioMate 160的样品要求进行系统性梳理，以指导实验人员更科学地开展检测工作。

二、样品类型的适用范围

1. 液体样品

BioMate 160主要面向液体检测，其典型样品包括：

• 核酸样品：DNA、RNA、寡核苷酸溶液。

• 蛋白质样品：总蛋白溶液、重组蛋白、多肽溶液。

• 酶反应体系：酶底物、产物及缓冲液组成的反应体系。

• 化学溶液：各种有机和无机溶液，如金属离子显色反应体系。

2. 固体样品（需前处理）

部分固体样品可通过溶解、萃取或稀释后检测：

• 药片及胶囊：经提取液溶解后进行定量。

• 食品粉末：蛋白粉、维生素粉需溶于适宜溶剂。

• 环境样品：土壤、沉积物需通过酸消解或有机溶剂萃取。

3. 其他样品类型

• 细胞裂解液：适用于蛋白和核酸的定量。

• 血液与血清样品：需去除杂质与蛋白沉淀。

• 发酵液与培养基：检测代谢产物和营养成分。

三、浓度要求

1. 核酸样品

• DNA与RNA检测常用范围为2 ng/μL – 2000 ng/μL。

• 吸光度值在0.1–1.0之间时，定量结果最为可靠。

• 若浓度过高，应进行10–100倍稀释，避免吸光度超出线性范围。

2. 蛋白质样品

• 紫外吸收法（280 nm）：适用浓度范围为0.1 mg/mL – 10 mg/mL。

• 比色法（Bradford、Lowry等）：线性范围一般在1 μg/mL – 100 μg/mL之间。

• 若样品浓度过低，可通过浓缩或延长检测时间提升信噪比。

3. 小分子与化学试剂

• 常见显色反应产物的检测浓度范围为μM – mM级。

• 建议检测前绘制标准曲线，以校正浓度与吸光度之间的关系。

四、体积要求

1. 标准比色皿检测

• BioMate 160常用比色皿体积为1 mL – 3 mL。

• 标准光程为1 cm，特殊情况下可选用0.5 cm或2 cm光程比色皿。

2. 微量检测模式

• 对于贵重或难以制备的大分子样品，可使用微量比色皿（50–100 μL）。

• 微量比色皿需保持样品液面覆盖光程窗口，避免气泡干扰。

3. 时间扫描与动力学实验

• 建议样品体积**≥1 mL**，保证反应体系在长时间检测中蒸发损失较小。

五、样品容器要求

1. 比色皿材质选择

• 石英比色皿：适用于190–1100 nm全波段，推荐用于核酸与蛋白质检测。

• 玻璃比色皿：适用波长大于320 nm，不适合紫外区检测。

• 塑料比色皿：适合一次性检测，波长范围受限（≥230 nm）。

2. 容器清洁度

• 使用前必须用去离子水和无水乙醇清洗并晾干。

• 避免残留物或划痕影响透光率。

六、样品前处理要求

1. 澄清处理

样品需保证透明无杂质：

• 使用0.22 μm或0.45 μm滤膜过滤。

• 对悬浊液需进行离心（12000 rpm，10 min）。

2. 去除气泡

比色皿中气泡会导致光程不均匀，建议检测前轻轻震荡或离心。

3. 溶剂选择

• 缓冲液：常用Tris-HCl、PBS等。

• 有机溶剂：乙醇、甲醇可用于某些小分子检测，但需注意溶剂本身吸收峰。

4. 稀释与浓缩

• 对高浓度样品进行稀释，使吸光度保持在线性范围。

• 对低浓度样品使用离心浓缩或膜超滤。

七、操作注意事项

1. 样品温度应保持室温，避免因温度差异导致光谱漂移。

2. 样品应尽快检测，避免因氧化或降解影响数据。

3. 使用多个样品时，尽量保持同一缓冲体系，减少背景差异。

4. 在动力学实验中，需先进行空白对照，确保体系稳定。

八、常见问题与解决方案

1. 吸光度值过高

• 可能原因：样品浓度过大、气泡干扰。

• 解决方法：稀释样品，检查比色皿内是否有气泡。

2. 吸光度值过低

• 可能原因：样品浓度过低、光程不足。

• 解决方法：更换长光程比色皿或浓缩样品。

3. 数据波动大

• 可能原因：样品中有悬浮颗粒或操作不稳定。

• 解决方法：过滤或离心去除杂质，确保样品均匀性。

4. 背景吸收干扰

• 可能原因：缓冲液或溶剂本身吸收。

• 解决方法：在相同条件下进行空白对照。

九、样品保存与稳定性

1. 短期保存

• 核酸与蛋白样品可置于4 ℃冰箱中保存数小时至数天。

• 对于不稳定的化学样品，应现配现用。

2. 长期保存

• 核酸样品可在-20 ℃保存数月。

• 蛋白质样品可添加甘油或保护剂，置于低温保存。

3. 防止降解

• 避免反复冻融。

• 添加适量抑菌剂或抗氧化剂。

十、未来优化方向

随着科研需求的增长，BioMate 160在样品处理和检测方面可能会进一步优化：

• 自动稀释系统：减少人工操作误差。

• 智能检测模块：自动识别样品类型并推荐检测条件。

• 微量检测技术：降低样品体积至纳升级，满足前沿研究需求。

十一、结语

赛默飞分光光度计BioMate 160作为一款应用广泛的紫外-可见分光光度计，对样品的浓度、体积、容器、前处理等方面都有明确的要求。只有严格遵循样品制备规范，才能确保数据的准确性与可重复性。科研人员在实验中应结合不同检测需求，灵活调整样品处理方式，使BioMate 160的性能得到充分发挥。