赛默飞分光光度计NanoDrop Eight使用方法详解

一、引言

NanoDrop Eight是赛默飞公司推出的多通道微量分光光度计，具备一次同时检测八个样品的能力。其设计基于NanoDrop经典平台，采用微量样品固定液滴方式，只需1–2 μL即可完成检测，省去了传统分光光度计对比色皿的依赖。NanoDrop Eight在核酸、蛋白质以及其他生物分子的定量和纯度分析中被广泛使用。熟练掌握其使用方法，不仅能够获得准确的数据，还能提高实验效率和可靠性。

二、NanoDrop Eight的仪器概述

1. 光学原理

• 光程通过液滴厚度控制，自动调整（1 mm、0.2 mm、0.05 mm），确保浓度从低到高都能覆盖。

• 检测波长范围190–850 nm，满足DNA、RNA、蛋白质和小分子检测需求。

2. 主要特点

• 微量检测：仅需1–2 μL。

• 高通量：一次可检测八个样品。

• 宽动态范围：DNA可达2–27,500 ng/μL。

• 全波段扫描：用于检测纯度、结构和杂质。

3. 适用范围

• 核酸定量及纯度检测。

• 蛋白质定量和纯度检测。

• 药物溶解度研究与复合物分析。

• 环境和食品样品中的生物分子检测。

三、使用前的准备工作

1. 仪器检查

• 确认电源和操作系统运行正常。

• 检查光学平台是否清洁无残留。

• 确保软件已启动并进入检测界面。

2. 样品准备

• 核酸、蛋白质样品需充分溶解，无沉淀和气泡。

• 上样前短暂离心，去除杂质和气泡。

• 浓度过高的样品需要适当稀释。

3. 参比准备

• 选择与样品一致的缓冲液作为空白对照。

• 先用参比进行基线校正，再检测样品。

4. 环境条件

• 室温保持在20–25 ℃之间。

• 避免阳光直射与强烈震动。

四、NanoDrop Eight的操作步骤

1. 启动与初始化

1. 打开电源，等待软件加载。

2. 选择实验模式（核酸、蛋白、全波段等）。

3. 检查光源状态，确认校正功能可用。

2. 基线校正

1. 将1–2 μL缓冲液滴加到检测平台。

2. 关闭平台，点击“空白”按钮。

3. 仪器自动记录基线，用于后续数据修正。

3. 样品检测

1. 使用移液枪吸取1–2 μL样品。

2. 将样品缓慢滴加到平台，避免气泡。

3. 关闭平台，点击“测量”按钮。

4. 仪器自动检测并输出浓度与纯度比值。

5. 记录或导出数据。

4. 多通道检测

• 将多个样品分别滴加至八个通道。

• 批量点击“测量”，仪器自动完成同步检测。

• 软件自动生成表格数据。

5. 清洁与复位

• 每次检测后，用无绒布和去离子水或70%乙醇擦拭检测平台。

• 确认无残留后再进行下一批次测量。

五、不同检测模式的使用方法

1. 核酸检测

• 适用范围：DNA、RNA、寡核苷酸。

• 波长选择：260 nm为主要检测点，230 nm与280 nm用于纯度评价。

• 数据解读：

• 260/280 ≈ 1.8：DNA纯度良好。

• 260/280 ≈ 2.0：RNA纯度理想。

• 260/230 在2.0–2.2：说明盐类或有机溶剂污染较少。

2. 蛋白质检测

• 适用范围：总蛋白、纯化蛋白、标签蛋白。

• 波长选择：280 nm处芳香族氨基酸吸收。

• 数据解读：

• 260/280 ≈ 0.57：纯蛋白样品。

• 若比值偏高，提示核酸污染。

3. 全波段扫描

• 范围：190–850 nm。

• 应用：检测杂质、蛋白二级结构、小分子结合位点。

• 使用方法：选择“扫描模式”，设定扫描范围与分辨率，仪器输出完整光谱曲线。

4. 高通量批量检测

• 方法：八通道同时上样，点击批量测量。

• 优势：数据自动整理，节省时间。

• 注意事项：确保每个通道样品体积一致。

六、数据解读与保存

1. 浓度计算
   软件根据比尔-朗伯定律自动计算样品浓度，无需人工换算。

2. 纯度比值

• 260/280：用于判断核酸与蛋白质纯度。

• 260/230：用于评估盐类或有机物残留。

3. 数据保存

• 可保存为Excel、PDF或原始光谱文件。

• 建议建立实验数据库，长期追踪样品检测记录。

七、常见问题与解决方法

1. 气泡干扰

• 表现：结果波动大或浓度异常高。

• 解决：样品上样前离心，移液枪垂直滴加。

2. 260/230比值偏低

• 原因：盐类、苯酚或胍盐污染。

• 解决：重新纯化样品。

3. 浓度过高饱和

• 原因：光程缩短后仍超出检测范围。

• 解决：稀释样品后重新测量。