赛默飞分光光度计NanoDrop Eight测试流程

一、前言

NanoDrop Eight是赛默飞推出的一款高性能多通道微量分光光度计，继承了NanoDrop系列在核酸、蛋白质等生物样品微量检测方面的优势，并通过八通道并行设计大幅提升了检测效率。其测试流程设计兼顾高精度和简便性，使研究人员能够在分子生物学、蛋白质组学、药物研发和临床检测等多个领域快速获得可靠数据。

测试流程是保证实验结果准确性与可重复性的关键。本文将系统介绍NanoDrop Eight的标准测试流程，包括样品准备、仪器开机与校准、检测步骤、数据分析与结果输出、维护与常见问题处理等，帮助科研人员全面掌握该设备的使用要点。

二、NanoDrop Eight的测试基本原理

1. 微量检测理念

传统分光光度计需要500 μL以上样品，而NanoDrop Eight仅需1–2 μL即可完成检测。其核心原理是利用两根光纤臂之间的液体桥构成光路，光程固定且可自动调整。

2. 光程调节

NanoDrop Eight能根据样品浓度自动选择合适的光程（1 mm、0.2 mm或0.05 mm），保证在宽浓度范围内保持检测精度。

3. 光电检测

样品对紫外-可见光的吸收由硅光二极管阵列检测，输出电信号，再结合朗伯-比尔定律计算浓度。

4. 八通道并行

仪器配置8个检测通道，可同时检测8个样品，极大提升实验效率，适合高通量研究。

三、测试前准备

1. 样品制备

• 体积：每个检测点通常需要1–2 μL样品；

• 浓度：DNA样品范围2–15,000 ng/μL，蛋白质范围0.1–200 mg/mL；

• 纯度：避免沉淀、杂质或气泡，以免影响光路。

2. 清洁与校准

• 清洁平台：用无核酸酶水或70%乙醇擦拭检测平台，确保无残留；

• 空白对照：准备与样品相同的缓冲液或溶剂作为基线校正。

3. 软件准备

• 启动NanoDrop Eight软件；

• 选择检测模式（核酸、蛋白质、荧光标记物、动力学等）；

• 建立实验项目文件夹，便于数据保存和管理。

四、标准测试流程

1. 开机与初始化

• 打开主机电源；

• 连接电脑与软件，确认仪器状态正常；

• 进行波长与光程自检，系统自动完成光学校准。

2. 空白校正

• 在每个通道加1–2 μL缓冲液；

• 关闭光纤臂，点击“Blank”进行空白测定；

• 软件自动保存空白值，作为后续样品检测的基线。

3. 样品加载

• 在检测平台中心滴加样品；

• 确保液滴覆盖光纤接触点，避免气泡；

• 关闭光纤臂，等待光路稳定。

4. 样品测定

• 点击“Measure”开始检测；

• 软件实时显示吸光度谱图及浓度结果；

• 可设置重复测量，提升数据可靠性。

5. 通道切换与批量检测

• NanoDrop Eight支持自动切换通道；

• 可一次性加载8个样品并同时检测；

• 软件可批量生成报告。

五、数据分析与结果输出

1. 吸光度与浓度计算

• DNA浓度通过260 nm吸光度计算；

• 蛋白质浓度通过280 nm吸光度或特定方法（BCA、Bradford）；

• 软件自动完成浓度换算。

2. 纯度判断

• 核酸纯度：260/280 比值应在1.8–2.0之间；

• 蛋白质纯度：260/280 比值一般约为0.6；

• 额外比值（260/230）用于判定有机溶剂或盐离子污染。

3. 标准曲线与定量分析

• 可建立标准品浓度曲线；

• 自动拟合并输出R²值，保证定量准确性。

4. 数据存储与导出

• 支持Excel、PDF、CSV等格式导出；

• 可直接上传至实验室数据库；

• 结果带有时间戳，方便追溯。

六、不同应用场景的测试流程

1. DNA/RNA检测

• 空白对照：使用TE缓冲液；

• 测定波长：260 nm；

• 输出结果：浓度（ng/μL）、纯度比值。

2. 蛋白质检测

• 空白对照：PBS或样品缓冲液；

• 测定波长：280 nm或显色法特定波长；

• 输出结果：浓度（mg/mL）、线性拟合曲线。

3. 多通道高通量检测

• 一次加载8个样品；

• 软件批量生成检测报告；

• 适用于基因测序前建库检测或临床批量样品分析。

七、提高测试精度的操作要点

1. 避免交叉污染：每次检测后用无核酸酶水清洁平台；

2. 控制样品体积：过量或不足均会影响结果；

3. 重复检测：关键样品建议检测3次，取平均值；

4. 定期校准：使用标准核酸或蛋白溶液进行性能验证；

5. 记录实验条件：温度、缓冲液成分应如实记录。

八、维护与常见问题

1. 平台残留问题

• 现象：样品残留导致后续检测值偏高；

• 解决：用无尘纸和乙醇清洁，必要时多次冲洗。

2. 光程异常

• 现象：浓度超出范围或结果不稳定；

• 解决：检查光纤臂，确认光程校准是否正常。

3. 气泡干扰

• 现象：谱图出现异常波动；

• 解决：重新加样，避免用力过大造成气泡。

4. 数据保存丢失

• 现象：未能找到实验数据；

• 解决：确认保存路径，建议开启自动保存功能。

九、与传统检测方法对比

从表中可以看出，NanoDrop Eight不仅提高了测试效率，还在样品消耗和结果精度方面显著优于传统方法。

十、结论

赛默飞NanoDrop Eight分光光度计以其微量检测、八通道并行、自动光程调节和高灵敏度探测的优势，在液体样品检测中展现了高效、精准和稳定的性能。通过科学规范的测试流程，科研人员能够在最小样品消耗条件下获得可靠数据，适用于核酸、蛋白质、药物及临床样品等多种应用场景。

规范化的测试流程不仅提高了实验精度与重复性，还使NanoDrop Eight成为实验室高通量检测的重要工具。掌握并优化测试流程，将进一步释放该仪器的潜能，为分子生物学和生命科学研究提供坚实的数据支持。