赛默飞分光光度计NanoDrop Eight实验经验

一、前言

NanoDrop Eight是赛默飞公司推出的多通道微量分光光度计，广泛应用于核酸、蛋白及细胞溶液等生物分子检测。其最大的优势在于高通量测定，能够同时检测多达8个样品，且仅需1~2 μL即可完成定量与纯度分析。经过大量实际使用，研究人员在样品准备、检测操作、数据分析和日常维护方面积累了丰富的经验，这些经验有助于避免常见错误，提高实验的准确性和效率。

二、实验前准备的经验

1. 仪器环境准备

• 将NanoDrop Eight放置在稳固的实验台面，远离震动源与强电磁干扰设备。

• 实验室温度保持在20~25℃之间，湿度控制在60%以下，以确保光学元件不受潮。

• 开机预热3~5分钟后再进行检测，使光源达到稳定状态。

2. 样品准备经验

• 核酸样品：溶解于无RNA酶、无DNA酶的缓冲液或水中，避免使用高盐缓冲液。

• 蛋白样品：使用PBS或Tris缓冲液，避免高浓度去污剂或有机溶剂。

• 细胞或菌液样品：需均匀混匀，避免沉淀。

• 建议样品浓度控制在仪器检测范围内，避免因浓度过高导致光程饱和。

3. 检测平台准备

• 每次检测前先用无核酸酶水清洗测量平台，并用无绒纸擦干。

• 对不同类型样品，使用相应的空白对照进行校正。

三、实验检测经验

1. 上样操作

• 使用移液器准确吸取1.5~2 μL样品，滴在检测平台中央。

• 避免样品形成气泡，气泡会导致光散射和曲线畸变。

• 样品覆盖检测窗口后，应立即关闭上盖，避免蒸发影响测定。

2. 测量模式选择

• 核酸检测模式：以260 nm为主波长，同时记录260/280和260/230比值。

• 蛋白检测模式：可直接测280 nm吸收，或选择显色法（BCA、Bradford等）。

• 细菌密度测定：在600 nm检测，绘制生长曲线。

• 全光谱扫描：适用于未知样品或需评估纯度的情况，覆盖190~850 nm。

3. 多通道测量经验

• NanoDrop Eight支持8通道同步检测，适合处理大量样品。

• 实验经验表明，通道之间的差异极小，但为避免误差，应统一样品体积和上样方式。