赛默飞分光光度计 BioMate 160 使用技巧

一、概述

赛默飞分光光度计 BioMate 160 是一款高性能紫外-可见光分光光度计，广泛应用于生命科学、药学、环境监测、食品分析以及教学实验。该仪器能够在 190–1100 nm 波长范围内进行精确测量，支持单波长、多波长、扫描、动力学和定量分析等多种模式。虽然设备本身功能完善，但实验结果的准确性和稳定性，取决于使用者是否掌握科学的操作技巧。本文将从多个角度系统总结 BioMate 160 的使用技巧，以帮助实验人员获得最佳实验数据。

二、基础操作技巧

1. 光源使用

• 预热：氘灯和钨灯均需预热 10–15 分钟，以稳定光强。

• 合理切换：紫外区（190–350 nm）使用氘灯，可见光区（350–1100 nm）使用钨灯。

• 减少开关：避免频繁开关光源，以延长灯泡寿命。

2. 波长选择

• 针对性选择：核酸测定用 260 nm，蛋白质可用 280 nm 或染料法 595 nm。

• 光谱扫描：在不确定检测峰值时，应先进行全光谱扫描，选择特征吸收峰。

• 校准波长：定期进行校准，避免因仪器老化造成误差。

3. 比色皿操作

• 材质匹配：紫外检测用石英比色皿，可见光检测用光学玻璃比色皿。

• 清洁度：比色皿外壁必须干净，避免指纹和水滴影响光路。

• 方向一致：同一实验中比色皿放置方向应一致，以保持光程相同。

• 轻拿轻放：避免划伤光学面，划痕会导致散射光干扰。

4. 样品处理

• 浓度控制：样品吸光度应保持在 0.1–1.0 范围，过高需稀释。

• 避免气泡：加样时应轻缓操作，气泡会干扰光路。

• 样品稳定性：对光敏性或易氧化的样品，应避光或在短时间内完成测量。

三、数据采集与分析技巧

1. 空白校准

• 每次实验前必须进行空白校准。

• 校准液应与样品溶剂完全一致，避免溶剂差异带来系统误差。

2. 重复性保证

• 每个样品至少测定三次，取平均值。

• 对动力学实验，应设定连续采样，避免人为间隔过大导致数据跳跃。

3. 标准曲线建立

• 定量实验必须绘制标准曲线，避免单点换算。

• 标准样品浓度范围应覆盖未知样品的预期浓度。

4. 背景扣除

• 样品中可能存在杂质干扰，应在相应波长进行背景扣除。

• 核酸检测应同时监测 A260、A280 和 A230，以排查污染。

5. 数据存档

• 实验数据应及时导出并保存，避免因仪器重置而丢失。

• 对重要实验，应保存完整光谱曲线，便于追溯。

四、应用场景技巧

1. 核酸检测

• 浓度换算：A260 = 1.0 时，双链 DNA 浓度约为 50 μg/mL，RNA 约为 40 μg/mL。

• 纯度判断：A260/A280 = 1.8–2.0 表示核酸纯度较高。

• 杂质排查：A260/A230 偏低说明可能有盐或酚类残留。

2. 蛋白质检测

• 紫外吸收法：适用于较纯净蛋白，但缓冲液中若含有吸收物质则不适合。

• 染料法：如考马斯亮蓝法（595 nm），灵敏度高，适合常规检测。

• 一致性控制：建议同一实验中使用同一品牌试剂，减少批次差异。

3. 酶动力学实验

• 反应早期：应重点记录反应初始线性阶段，数据最具代表性。

• 采样间隔：常设定 5–10 秒采样一次，根据反应速度调整。

• 温度条件：反应温度需保持恒定，波动会显著影响反应速率。

4. 微生物和细胞检测

• OD600 测定：用于细胞或细菌生长曲线绘制。

• 均匀性：测定前轻轻混匀，避免沉淀或团聚导致测量不准。

• 时间点一致：采样间隔应固定，保证曲线可比性。

5. 药物与环境样品检测

• 全波段扫描：药物降解研究需记录光谱随时间的变化。

• 多波长测定：环境检测样品复杂，应在多个波长下检测。

• 标准对照：与标准溶液比对，可提高可靠性。

五、维护与保养技巧

1. 光源维护

• 氘灯寿命约 1000 小时，应记录累计使用时间，及时更换。

• 钨灯寿命较长，但也需定期检测亮度。

• 建议一次实验中保持光源常亮，避免频繁开关。

2. 仪器清洁

• 每次实验后清洁比色皿槽，防止残液腐蚀。

• 光学窗口应使用无尘布清洁，避免使用粗糙纸巾。

• 长期不用时应加盖防尘罩。

3. 校准与检测

• 定期进行波长校准与光度校正。

• 若出现异常漂移，应及时联系专业技术人员。