奥林巴斯显微镜CX33样本准备流程详解

奥林巴斯CX33显微镜是一款高性能的生物显微镜，广泛应用于细胞、生物组织、微生物、临床病理等观察研究场景。样本准备的质量直接影响显微观察的成像清晰度和准确性，因此，科学规范的样本处理流程是显微操作中不可忽视的重要环节。

本指南将围绕不同样本类型，结合CX33显微镜的光学成像特性，介绍完整的样本准备步骤，帮助用户提高观察效果，减少实验误差。

一、明确样本类型与观察目的

在进行样本制备前，首先需明确观察内容及所需观察层次，这决定了样本处理方式与染色方法的选择。常见的观察对象包括：

• 动物或植物组织切片

• 单层细胞样本

• 血液涂片

• 微生物培养物

• 粉尘、纤维、颗粒等无机样本

每类样本因物理特性和观察需求不同，其准备流程也有所差异。

二、基本工具与材料准备

为了顺利进行样本制备，以下工具和试剂应事先准备齐全：

• 干净的载玻片与盖玻片（要求无划痕、无灰尘）

• 解剖针、镊子、切片刀、滴管、毛刷等基本实验工具

• 染色液（如苏木精-伊红、瑞氏染液、革兰染液等）

• 固定液（如福尔马林、乙醇、甲醛等）

• 蒸馏水或PBS缓冲液

• 滴加封片剂（甘油或封片胶）

• 恒温水浴锅、离心机（视样本类型而定）

• 载玻片清洁剂、无纺布、酒精棉球等辅助用品

三、样本制备的通用步骤

样本准备过程可大致分为以下几大步骤：

1. 样本采集

样本应以无污染方式采集并快速转入预处理流程。例如：

• 组织样本可通过活检或解剖获得；

• 微生物样本可直接取自培养基表面；

• 血液样本通过静脉采血并滴于载玻片上。

采集后尽快进行后续处理以防细胞结构变性或降解。

2. 固定处理

固定的目的是维持细胞及组织结构稳定，防止分解和形态改变。根据样本类型选择合适的固定液：

• 组织切片常使用10%中性福尔马林；

• 细胞涂片可使用甲醇或乙醇快速固定；

• 血液样本通常采用风干固定即可；

• 微生物样本先空气干燥，再使用热固定或酒精固定。

固定时间依所用化学品浓度与样本厚度调整，一般为10分钟至24小时不等。

3. 脱水和透明化（适用于组织样本）

对于厚组织切片，为便于切片机操作及后续染色观察，需进行脱水处理：

• 使用不同浓度梯度的乙醇（70%→95%→100%）逐级脱水；

• 再使用二甲苯或其他透明剂处理，使组织充分透明。

此过程需在通风橱中操作，防止有害蒸气吸入。

4. 石蜡包埋与切片（组织样本专用）

• 脱水和透明化完成后，将组织嵌入液态石蜡中，冷却成块；

• 使用切片机将石蜡块切成4-10μm厚的组织片；

• 切片贴附于预热载玻片表面，使其粘附牢固。

该步骤主要适用于观察组织形态结构的场景。

5. 样本染色

染色可以增强细胞或组织的对比度，便于显微镜下识别结构特征。常用染色方法有：

（1）HE染色（Hematoxylin-Eosin）

适用于组织样本，染后细胞核呈蓝紫色，胞质呈粉红色。适合观察结构清晰度与病理变化。

（2）Giemsa染色或Wright染色

适用于血液、骨髓涂片，便于识别红白细胞类型及分布。

（3）革兰染色

用于细菌分类染色，便于区分阳性与阴性细菌。

染色时间依染料浓度与样本厚度调整，并辅以分步冲洗去除多余染液。

6. 冲洗与脱水（若需要）

染色后样本需用蒸馏水或缓冲液充分冲洗，然后再次脱水（组织类），以防止染液溶解。

四、装片与封片步骤

1. 涂片样本（细胞、血液、细菌）

• 将样本均匀涂布于干净载玻片表面；

• 待风干或固定后进行染色；

• 染色完成后盖上盖玻片；

• 滴加1-2滴封片剂以封闭空气，防止干裂。

2. 组织切片样本

• 使用滴管在切片中心滴加封片胶；

• 轻放盖玻片，使气泡自然排出；

• 多余封片剂可用纸巾吸除；

• 放置于水平面风干。

此过程要求操作轻柔，避免压裂盖玻片或移动样本位置。

五、观察前检查与显微镜调整

使用奥林巴斯CX33显微镜进行观察前，需确保样本与仪器状态符合以下要求：

1. 样本检查

• 观察样本是否完整、干净、无气泡；

• 载玻片无指纹、灰尘或残留液体；

• 染色对比明显，无过度沉染或染色不足；

• 盖玻片未松动、无滑移现象。

2. 显微镜准备

• 清洁物镜和目镜，避免镜头污渍影响成像；

• 调节灯源亮度与孔径光阑；

• 选择合适物镜进行初步聚焦，再逐步调整倍率；

• 确保平台移动顺畅，载物台夹紧载玻片。

CX33显微镜具备防霉镜头、高对比光学系统，适合长时间精密观察，建议从低倍物镜开始，逐步提高观察倍率，以找到最清晰视野。

六、不同样本类型的特别注意事项

1. 血液涂片

• 涂片厚度要适中，避免细胞重叠；

• 风干速度要快，防止细胞变性；

• 染色时应严格控制时间，避免着色过深或过浅。

2. 微生物样本

• 涂抹需均匀，不可太稀；

• 热固定时注意温度与时间，防止细胞破裂；

• 染色后冲洗要轻，避免微生物被冲走。

3. 植物细胞或组织

• 细胞壁结构较厚，染色时间适当延长；

• 切片应尽可能薄且完整；

• 可选用棉蓝或碘液等染色剂以增强细胞壁对比度。

七、样本存储与再观察

观察结束后，可根据实验需求对样本进行保存：

• 封片完整的样本可存放于样本柜；

• 存储前记录样本信息，标注样本编号、染色方式、制备时间；

• 样本应远离高温、高湿及阳光直射环境；

• 某些染色样本（如荧光染色）应避光存储，并尽快观察完毕。

八、总结

奥林巴斯CX33显微镜样本准备流程是一个多步骤、精细化的工作，涵盖采样、固定、染色、封装、检测等关键环节。每一步的准确性都对显微观察效果产生直接影响。根据样本类型选择合适的处理方案，结合CX33显微镜的光学优势，能大幅提升图像质量与实验效率。