奥林巴斯倒置显微镜IX81使用方法

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一、系统组成与功能简介

1. 倒置结构优势

IX81采用倒置光路设计，物镜位于样本下方，适合：

35 mm、60 mm培养皿；
多孔板（6孔、24孔、96孔）；
玻底培养皿与标准载玻片；
微流控芯片或类器官球体样本。

倒置设计便于上方加液干预、观察活细胞状态。

2. 主要组件构成

电动物镜转盘：支持6–8位物镜快速切换；
电动XY载物台：高精度移动样本；
Z轴聚焦驱动系统：支持自动聚焦与Z-stack；
电动滤光块转轮：多通道荧光快速切换；
光源模块：LED、汞灯、金属卤素可选；
图像采集相机：CCD或sCMOS，配套C-mount接口；
控制软件：主要使用 Olympus CellSens 或 OIS 平台。

二、使用前准备与开机步骤

1. 环境检查

确保台面水平、振动隔离良好；
保持室温恒定，避免热漂移影响；
光源通风正常，杜绝光源过热；

2. 接线确认

检查主机电源、控制器、相机、光源、Z轴平台线缆连接牢固；
检查相机接口是否紧固，USB3.0或CameraLink连接正常；
滤光块与物镜位置就绪、无松动。

3. 开机顺序（推荐）

复制编辑依次开启：
主电源 → 光源电源 → 控制器 → 相机电源 → 计算机 → 图像采集软件

避免先开软件，导致识别不到设备模块。

三、基础成像操作流程

1. 样本放置

将培养皿或玻片固定在载物台上；
使用磁吸式或弹簧夹具稳固载体；
确保样本位于中心孔径光路正上方；
盖上防尘罩（非必要时可省略）。

2. 切换物镜与调节视野

在软件中选择目标物镜（10×/20×/40×/60×/100×）；
电动物镜转轮将自动旋转就位；
粗调Z轴至近似焦点位置；
微调获取清晰图像。

高倍观察前建议先用10×定位、后切换高倍。

3. 光源与图像设置

明场：使用卤素或LED白光；
相差：确认相差环与物镜环匹配；
DIC：插入对应棱镜组并调节角度；
荧光：打开激发光源、调节亮度；

在图像软件中调整：

曝光时间；
增益（Gain）；
灰度级（Bit Depth）；
白平衡与直方图对比度。

实时查看图像质量变化，避免过曝或图像过暗。

四、荧光成像与通道配置方法

1. 激发/发射通道选择

常用通道示例：

通道名	激发波长	发射波长	用途
DAPI	360–380 nm	450–470 nm	核染色
FITC	470–495 nm	510–550 nm	GFP
TRITC	540–560 nm	580–620 nm	RFP
Cy5	620–650 nm	660–700 nm	Alexa Fluor 647

在软件中添加通道，并指定每个通道所用滤光块；
分别设定曝光时间、光源强度、通道图像伪色；
设置轮拍顺序，实现快速连续荧光拍摄。

2. 多通道融合

支持通道分屏或合并；
可设定伪彩显示色调；
自动对齐图像，便于共定位分析；
保存为融合图像或原始分通道图像。

五、时间序列与Z轴堆栈拍摄方法

1. 时间序列（Time-lapse）

适用于细胞迁移、凋亡、蛋白动态追踪等实验：

设置采集周期（如每5分钟1帧）；
总时长可定义为小时级别；
可启用自动聚焦保持图像清晰；
多通道条件下可同步轮拍。

支持自动中断、提前终止、阶段拍摄等策略。

2. Z-stack扫描

适用于厚样本、类器官、三维细胞球等：

设置焦点起始与终止位置；
设定每层间隔（如1μm）；
自动拍摄每一Z层图像；
生成最大投影或三维重建图。

Z-stack可与时间序列组合，实现“Z-T图像序列”。

六、多区域扫描与高通量采集

1. 多点定位采集

在导航界面手动标注多个观察区域；
每个区域可设定独立采集通道、时间参数；
自动按顺序依次拍摄；
适用于多孔板、组织切片拼接、药物筛选等场景。

2. 自动图像拼接

设置XY扫描区域；
设定图像重叠比例（如10–15%）；
系统自动拼图，生成大幅视野合成图；
适用于组织横切面观察、病理样本全景扫描。

七、图像保存、导出与数据管理

1. 图像保存格式

格式	特点
OIR	奥林巴斯专用格式，含元数据
TIFF	支持多通道、16位灰度
JPG/PNG	便于展示，压缩图
AVI	时间序列导出为视频格式

可按命名规则自动保存（含样本名_通道_时间点等）。

2. 数据整理建议

每次实验新建独立文件夹；
配置文件、图像、分析结果分开存储；
同步保存校准文件、滤光配置表；
可设定自动备份路径至外部硬盘或NAS。

八、关机与维护操作

1. 正确关机顺序

复制编辑结束采集 → 关闭光源 → 退出软件 → 关闭相机 → 主机电源 → 控制器 → 断电源插头

高温光源（如汞灯）关闭后需预冷3–5分钟。

2. 日常维护操作

项目	频率	方法
物镜清洁	每日	镜头纸轻拭前镜面
载物台除尘	每日	干净布擦拭，不残留液体
滤光块检查	每周	检查滤片是否有灰尘或划痕
软件升级	每季	检查版本，更新补丁
校准检查	每季度	重设像素比例与通道偏移
相机接口紧固	每月	避免抖动与图像漂移

九、常见问题与应对方法

问题	原因	解决建议
图像模糊	未对焦 / 镜头污渍	调焦 / 清洁物镜
图像过曝	曝光时间过长	降低曝光或增益
通道错位	滤光块松动	重新插入滤光片并校准
相机无图像	接口松动	检查USB / 更换线缆
自动对焦失败	样本对比度低	手动调焦至近焦点再切换自动

十、总结

奥林巴斯倒置显微镜IX81具备高度自动化与智能化的图像采集系统，其使用方法涵盖从样本加载、光路调节、模式切换到图像采集、处理、保存的全过程。熟练掌握其多通道成像、时间序列采集、Z-stack扫描和高通量区域处理能力，可显著提升实验效率与数据可靠性。规范操作、按流程执行并定期维护，是保障设备稳定运行和图像质量的核心要点。

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