在 IX-70 系统中,滤光片组一般为标准模块化滤光块(Filter Cube),每个滤光片组通常包括三大核心部件:
部件名称 | 功能说明 |
---|---|
激发滤光片(Excitation Filter) | 选择特定波长的激发光,通过该波段照射样本 |
二向色镜(Dichroic Mirror) | 位于45°位置,反射激发光并透射发射光,分离光路径 |
发射滤光片(Emission Filter) | 仅允许标记染料所发射的特定波段光通过进入相机或目镜 |
滤光片组安装在一个机械金属方盒中,通过卡槽固定于荧光模块内的旋转转轮或滑块轨道中,可进行多通道快速切换而不会产生光路偏移或干扰。
IX-70 支持多通道荧光成像,可根据实验需求配置以下常见滤光片组:
通道名称 | 激发波长(nm) | 发射波长(nm) | 染料/荧光蛋白举例 |
---|---|---|---|
DAPI | 350–370 | 430–470 | DAPI, Hoechst |
FITC | 460–495 | 510–550 | FITC, Alexa Fluor 488, GFP |
TRITC | 530–560 | 570–620 | TRITC, RFP, Alexa Fluor 546 |
Cy5 | 620–650 | 660–700 | Cy5, Alexa Fluor 647 |
CFP | 430–450 | 470–500 | CFP, ECFP |
YFP | 490–515 | 520–550 | YFP, Venus |
用户可根据标记染料波长特性选择最匹配的滤光片组,从而提高激发效率和信噪比,减少背景光泄漏。
滤光片组通常安装在 IX-70 荧光模块中的转轮组件或滑动式滤块支架上,模块位置位于物镜光路与目镜通道之间,确保激发光直接照射样本,发射光最短路径进入检测系统。
IX-70 支持以下几种切换方式:
手动旋转式滤光片轮(适用于3~6个滤光通道)
滑轨式滤光模块插槽(适用于频繁更换场景)
电动控制切换器(可配合时间序列与多通道成像系统)
切换过程中滤光块定位精确,不需每次重新校正图像光轴或重调焦距。
评估滤光片组的成像表现,应重点关注以下光学参数:
参数名称 | 说明 |
---|---|
带宽(Bandwidth) | 指滤光片允许通过的光波范围,窄带宽有助于减少背景干扰 |
峰值波长(Peak) | 激发或发射滤光片传输率最高的中心波长 |
阻隔能力(OD值) | 滤光片对非目标波段光的阻挡能力,OD5表示10⁻⁵透光率,抑制漏光 |
透过率(Transmission) | 滤光片对目标波段光的透过效率,决定成像亮度 |
漏光控制 | 是否有边缘波段光线透过,如蓝绿染料之间是否存在交叉信号干扰 |
高质量滤光片组具有高透过率、低背景噪声、强阻隔能力,可显著提高荧光图像质量。
在进行多重荧光标记实验时,合理选择滤光片组合是确保图像通道互不干扰的关键。
DAPI + FITC + TRITC:广泛应用于核染色+胞质标记;
CFP + YFP + mCherry:用于多色蛋白定位研究;
GFP + Cy5:避免绿红重叠,提升信号分辨率;
FITC + Alexa Fluor 647 + Hoechst:适合免疫染色标记的多靶点共定位观察。
每种组合需避开波段重叠,必要时可增加分色图像后处理步骤。
使用 IX-70 搭配高质量滤光片组,用户可获得以下图像特征:
荧光强度高,背景暗,信噪比优异;
染料信号清晰分离,颜色无串扰;
信号响应稳定,曝光时间短;
长时间观测中光漂白速率低;
通道叠加图像定位一致,无需矫正位移。
即便是低浓度标记、弱信号细胞,也可实现可视化追踪与半定量分析。
IX-70 支持奥林巴斯原厂滤光片组,同时也兼容多种第三方专业滤光片制造商,包括:
Chroma Technology
Semrock(IDEX)
Omega Optical
Thorlabs
滤光块尺寸标准为25mm或32mm圆形滤片,可按标准滤光块结构定制插入,无需更改支架。
实验类型 | 推荐滤光片组 | 特点说明 |
---|---|---|
细胞核标记 | DAPI | 激发波短,避免与其他荧光重叠 |
绿色荧光蛋白定位 | FITC / GFP | 适配高通透绿光滤片,增强细节 |
三色免疫荧光共定位 | DAPI + FITC + TRITC | 三色分离明确,适合复合结构成像 |
活细胞钙成像 | Fura-2 / Fluo-4 | 双通道切换快、响应快 |
多色蛋白追踪 | CFP + YFP + mCherry | 色彩分布宽泛,避免波段重叠 |
高通量药物筛选 | 自动滤片切换模块 | 稳定切换速度配合自动曝光控制 |
为保障滤光片组的使用寿命与光学性能,操作人员应遵循以下规范:
避免指纹接触滤片表面,可使用无尘手套操作;
定期检查滤光片镀膜是否脱落、起雾或刮痕;
储存在干燥环境中,使用专用滤片盒收纳;
使用无酒精镜头纸轻轻擦拭污渍,严禁使用强酸碱清洁液;
荧光观察结束后尽快关闭激发光源,防止滤光片老化;
避免高温高湿条件长期存放,防止滤膜材料变质。
优质滤光片在正常使用下寿命可达数年,性能稳定可靠。
奥林巴斯显微镜 IX-70 在荧光成像系统设计中,赋予滤光片组极高的模块化、通道兼容性与光学性能,支持多通道高灵敏度成像与高通量实验需求。其滤光片组不仅在波段选择、信号区分度和透光效率方面表现出色,同时在切换操作、稳定性控制和成像一致性方面也满足严苛的科研需求。
合理配置滤光片组、匹配样本染料、控制通道顺序,是提升成像质量、增强数据可比性的重要保障。通过规范化管理与维护,IX-70 的滤光片系统将在生命科学研究中持续发挥重要作用。
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