一、设备准备与初始化

1. 环境与平台布置

• 工作平台应平稳、防震、无电磁干扰。

• 建议安装在独立实验室内，具备通风系统与恒温环境，便于长期细胞成像实验。

• 避免显微镜受阳光直射，防止光学器件老化。

2. 开启顺序

• 打开主电源，启动荧光光源（汞灯或LED灯）。

• 打开照明控制器、摄像头供电及图像处理软件。

• 检查显微镜底部风扇运转是否正常（如配有冷却系统）。

二、样品准备与加载

1. 样品类型支持

IX-70支持多种容器：

• 培养皿（35mm、60mm、100mm）

• 多孔板（6孔、24孔、96孔）

• 玻片底培养瓶

• 标准载玻片

2. 样品预处理建议

• 保持样品表面无气泡，液面平整，避免光线散射。

• 若为荧光样品，建议避光操作，减少荧光衰减。

• 使用恒温装置时提前预热至实验温度（如37℃）。

3. 样品安装方法

• 取下载物平台夹具，放置样品于中心位置。

• 微调平台位置，使样品目标区域位于物镜视野中心。

• 启用夹持装置固定样品，防止观察中发生位移。

三、光学系统调整

1. 物镜选择

• 初始观察建议使用10X或20X物镜定位。

• 根据实验要求，切换至40X、60X、100X等高倍率物镜。

• 若为相差或荧光观察，应配备带环带或高NA物镜。

2. 聚光镜调节

• 确保聚光镜居中，数值孔径（NA）匹配所用物镜。

• 明场模式下应调整孔径光阑获得适当对比度。

• 荧光观察时聚光镜可置于“荧光位置”或完全打开。

3. 光源亮度与均匀性

• 明场照明建议从低亮度逐步调节至适宜图像对比度。

• 荧光灯源启动后需预热5~10分钟，以稳定光强。

• LED光源可即时使用，但需避免高强度持续照射。

四、观察模式切换

IX-70支持多种观察方式，用户可根据实验内容灵活切换：

五、成像与对焦操作

1. 初始对焦操作

• 使用粗调旋钮将物镜缓慢接近样品底面。

• 观察样品轮廓时转动微调旋钮，获取初步清晰图像。

• 切换至更高倍物镜后再次微调。

2. 细节成像技巧

• 可采用微小Z轴步进扫描（Z-stack）寻找最佳焦面。

• 使用软件“实时对焦辅助”功能优化成像清晰度。

• 对于层次结构样品，可结合图像堆叠提升景深。

3. 多通道焦点对齐

• 由于不同滤镜组透光性略有不同，可能导致焦面偏移。

• 可通过微调Z轴或软件设定不同通道对应的焦面高度，确保多色图像配准。

六、图像采集与处理

1. 摄像系统设置

• 安装CCD或CMOS相机于三目端口。

• 使用成像软件设置曝光时间、增益、伽玛值。

• 高通道实验应开启自动白平衡与背景扣除功能。

2. 图像采集格式

• 明场图像建议保存为TIFF格式，保证图像质量。

• 荧光图像可保存为16位RAW格式，用于定量分析。

• 动态观察建议使用AVI或MP4格式录制。

3. 图像分析扩展

配合图像处理软件可执行：

• 细胞计数与测量

• 强度定量（荧光信号）

• 三维重建（Z轴图像堆叠）

• 时间序列分析（细胞运动、反应轨迹）

七、多通道成像协同操作

1. 滤镜组切换

• IX-70支持最多6组荧光滤镜模块快速切换。

• 每次切换后，需重新确认光路匹配及荧光通道强度。

2. 光源衰减补偿

• 设置软件中不同通道的曝光补偿值，保持图像亮度一致。

• 可通过ND滤光片调整激发光强度，减少荧光漂白。

3. 自动化多通道采集（可选）

• 若配备电动滤镜转盘与自动Z轴控制系统，可批量采集多通道图像。

• 系统自动执行通道切换、焦点微调、图像保存等流程，提高效率与重现性。

八、特殊显微操作技巧

1. 时间序列实验

• 设定每隔一定时间拍摄一帧图像，观察细胞变化。

• 配合恒温箱与二氧化碳培养舱，实现长时间活细胞实验。

2. 光遗传学操作支持

• 配置蓝光激发LED，与GFP通道配合进行刺激-记录实验。

• 结合钙信号或神经反应进行即时响应观察。

3. 微注射实验（配件支持）

• 可安装显微注射器支架，辅助完成单细胞注射、细胞融合等操作。

• IX-70平台空间足够，便于操作器械集成。

九、日常维护与操作注意事项

十、总结

奥林巴斯IX-70显微镜作为一款高端倒置荧光显微平台，其显微操作涵盖样品管理、光学系统调节、观察模式切换、多通道成像、图像采集与数据分析等一系列流程，是实现高质量图像输出与精准实验数据的关键环节。通过对设备性能的充分理解与规范操作，用户可在细胞生物学、药理学、组织工程、发育生物学等多个领域中进行可靠、可重复的实验操作。