厂家长沙实了个验仪器制造有限公司，质保3年只换不修。

以下为 Bio‑Rad 型号 1652100（MicroPulser Electroporator）电穿孔设备在细胞培养及转化实验中的全面使用指南。内容涵盖产品概述、设备安装与准备、细胞培养前的样品准备、参数设定与电穿孔操作流程、转化后细胞复苏与培养、典型应用提示、维护保养与常见故障排查。为保证操作规范、实验成功率及设备寿命，请严格按照以下步骤执行。

一、产品概述

型号 1652100 是 Bio-Rad 推出的 MicroPulser Electroporator 电穿孔仪，专为细胞、微生物、电穿孔转化设计。 
其主要特点包括：

• 单键式脉冲触发、附载电击比色皿槽，操作简单。 

• 预设优化程序（5 种细菌＋5 种真菌）便于快速实验启动。 

• 电弧抑制系统（Arc Quench）减少电弧发生，保护贵重样本。 

• 宽参数可调：输出电压可达 3000 V，输出电流峰值超 100 A，可手动调节电压、脉冲宽度。 

• 体积小巧（约 29×21×8 cm）、重量约 2.9 kg，实验室空间占用少。 

应用范围：适用于细菌（如 E. coli）、酵母、其他微生物体，亦可扩展至某些较易转化的真核细胞系。尤其适合研究实验室进行常规转化、电穿孔实验。

二、设备安装与准备

2.1 安装位置与电源要求

• 将设备放置在稳固、水平、无振动、无液体溅落的实验台面。

• 确保设备良好接地，以避免静电或电击风险。

• 电源要求：输入为 100-120 V 或 220-240 V，50/60 Hz。

• 在通电前，确认比色皿槽、连接导线、外壳无破损、无松脱。

2.2 环境条件与安全注意事项

• 建议操作温度范围约 3.5 ℃ 至 35 ℃。 

• 避免在高湿、易结露或含尘环境中使用，以免影响电极性能或产生电弧。

• 操作时请穿戴标准生物安全防护装备（实验服、护目镜、手套），并在无人员或无电源侵入的情况下进行电击操作。

• 每次操作前务必检查电击比色皿是否配装正确、无裂痕、无残液、无气泡；如发现异常请立刻更换。

2.3 设备开机与自检

• 接通电源，开启设备。设备进行内置自检，包括电压、电阻、时间常数等系统状态。

• 确认显示屏读取正常，无报警或闪烁提示。

• 若设备有预设程序功能，可先选择一项标准程序（例如细菌 E. coli 转化程序）进行一空白测试，确保输出规格正常。

三、细胞培养前的样品准备

3.1 细胞类型选择与状态

• 对于电穿孔转化而言，细胞应处于最佳生长状态：细菌处于对数生长期，酵母或真核细胞亦应为活跃增殖期。

• 转化效率与细胞状态高度相关：细胞密度、活力、外源物质纯度均为关键因素。

• 若使用大肠杆菌 (E. coli) 等，建议用新鲜制备的电 competent 细胞，低温保存，并尽快使用。

3.2 样品液体准备与缓冲体系

• 使用无离子、高纯度的电穿孔缓冲液或自配含低盐、无钙镁离子的缓冲体系，避免高离子强度引起电弧。

• 洗涤细胞：将培养细胞离心后，弃上清，用冷却缓冲液重悬洗涤 1-2 次，以去除残余培养基中的盐分与蛋白。

• 最终重悬至合适体积（例如 50 µL-100 µL）—具体视细胞密度与实验设计而定。

• 加入外源 DNA/RNA 或蛋白复合物时，确保无气泡，且混合均匀。避免在比色皿中留大气泡，因为气泡可能导致电弧。

• 比色皿 (electroporation cuvette) 的选择也很关键：可选配 0.1 cm、0.2 cm、0.4 cm 间隙，根据样品体积与类型选择。 

3.3 样品装入比色皿

• 将重悬细胞与外源物质混合后，转移至冷却后的比色皿中（如 4 ℃冰上预冷 5-10 min）。

• 装入体积应适合比色皿规格，例如对于 0.2 cm 间隙比色皿，常见体积为 40-80 µL。

• 检查液面是否与电极顶端齐平，确保无气泡。若有气泡应轻轻颠管或离心，以去除。

• 将比色皿插入设备卡槽，确保接触良好、固定牢靠。

四、参数设置与电穿孔操作流程

4.1 参数模式选择

• 该设备主要输出 指数衰减波（exponential decay） 模式，适用于细菌、酵母等原核或微生物体。 

• 根据样品类型，也可选择或手动调整电压、时间常数以及电容参数。设备支持手动优化。 

4.2 关键参数设定

• 电压 (Voltage)：根据比色皿间隙及细胞类型设定。例如：对于 0.2 cm 间隙的细菌转化常见电压约 1500–2500 V，但具体需实验优化。

• 时间常数/脉冲时间 (Time constant / Pulse width)：一般设定在 1.0-4.0 ms 范围内，精度为 0.1 ms。 

• 预设程序：设备内置少量预设，可快速选择细菌或真菌标准转化程序，便于操作。

• 手动模式：若为特殊细胞系、或较大体积比色皿，可手动设定电压至 3000 V 以上，以提高转化效率（但应遵循细胞耐受范围）。 

4.3 操作流程

1. 将插入好的比色皿定位在设备插槽中，盖好保护盖（若设备配备）。

2. 在设备界面中选择预设程序，或进入手动设定界面，输入所需电压及时间常数。

3. 确认所有参数无误后，按下 “Pulse” 启动键，设备将充电并释放脉冲。脉冲结束后，设备显示实际电压、时间常数等数据，供记录和重复性分析。

4. 操作完成后，立即将比色皿从槽位移出，迅速将样品转移至预热恢复培养液中，以降低应激并提高存活率。

5. 记录每次实验参数（电压、时间常数、样品体积、细胞浓度等）以及转化效率、存活率数据，以便后续优化。

4.4 注意事项与优化建议

• 若出现“电弧（Arc）”警报或火花、样品烧焦，则应立即停止并分析原因。常见原因包括：液体中气泡、太高离子强度、液体体积过多、比色皿间隙不匹配。

• 若细胞活率低但转化效率也低，可能因细胞状态欠佳，建议优化细胞培育方法、降低电压或脉冲时间。

• 若转化效率不高但存活率高，建议适当提高电压或延长脉冲宽度，但谨慎以免损害细胞。

• 比色皿质量、预冷状态、操作速度、恢复步骤等均会显著影响最终结果。每一步都不可忽视。

五、转化后细胞复苏与培养

5.1 立即处理

• 电穿孔结束后应立即将细胞加入或转移至预热（通常 37 ℃）含血清或相应恢复培养液中。时间越快越有利于细胞存活。

• 对于细菌或酵母，可加入适当恢复液（如 SOC 培养基）并在非抗选择条件下短暂培养（如 20-30 分钟）以恢复细胞膜完整性。

• 对于真核细胞或悬浮细胞，建议将细胞轻轻回收、置于培养瓶或培养皿中，置于适宜 CO₂ 埵育箱中进行复苏培养。

5.2 培养条件与观察

• 转化后建议适度降低培养应激：初始培养可缩短抗生素筛选时间，给予细胞适应期。

• 对于细菌/酵母转化，转化后可直接铺板于选择性平板（含抗生素）测定转化阳性克隆数。

• 对于真核细胞，应在转染后 24-48 小时内观察细胞形态、存活率、荧光/报告基因表达情况。记录数据。

• 若转化效率高，但细胞形态异常或活性降低，需确认电穿孔参数是否超出细胞耐受范围或复苏步骤是否及时。

5.3 数据记录与实验优化

• 建议记录如下变量：细胞类型、细胞浓度、外源物质量（DNA/RNA/蛋白）、比色皿规格、电压、时间常数、恢复培养条件、转化效率（阳性克隆数／总细胞数）、细胞存活率。

• 通过多次重复实验，分析哪些参数对效率影响最大（如电压、脉冲时间、细胞浓度、缓冲液成分）。制定优化方案。

• 在重复实验中建议只变动一个参数，其余保持恒定，以便分析因果关系。

六、典型应用提示

虽然 1652100 型号主要设计用于微生物（细菌、酵母等）转化，但在某些条件下亦可尝试用于真核细胞简易转导，前提是细胞类型较为易于电穿孔且已针对参数优化。以下为典型提示：

• 对于 E. coli：可选 0.1 cm 或 0.2 cm 间隙比色皿、初始电压约 1500-2500 V、脉冲时间 ~2-4 ms。

• 对于酵母（如 S. cerevisiae）：建议用 0.2 cm 间隙比色皿、电压略高于细菌、优化时间常数。

• 对于真核细胞（若尝试）：建议先做小体积试验、选用预冷细胞、优化脉冲条件、重点观察存活率。

• 若使用大体积比色皿（如 0.4 cm 间隙），可考虑将电压提高至接近设备极限（如接近 3000 V），但必须保证细胞耐受，并严格控制气泡与盐离子强度。

• 每次实验后，应保存“有效参数档案”，便于今后同类型细胞重复使用。

七、维护保养与故障排查

7.1 日常维护

• 每次实验结束后，断开设备电源，并将比色皿槽、电极接触面用无纤维脱落的布擦拭干净，确保无液体残留。

• 定期检查电击槽内比色皿插槽是否干净、无腐蚀或酸碱残留。若发现电极表面腐蚀或损坏，应及时更换。

• 若设备长时间不使用，建议覆盖防尘罩，放于干燥环境，并断开电源。

• 切勿使用腐蚀性强或含金属颗粒的溶液直接装入比色皿电击，以避免损坏设备。

7.2 校准与检测

• 建议每年度或每频繁使用后进行一次系统校准，检查输出电压、时间常数与设备内部显示是否一致。

• 在校准或维护中，建议记录基线测量结果，作为设备性能追踪依据。

• 若设备已使用多年或脉冲数已大，建议与厂商/代理商商议更换电容、电极模块、内部板卡等，以维持性能。

7.3 常见故障与排查

八、总结

总而言之，型号 1652100 的 MicroPulser 电穿孔仪是一款操作简便、性能稳定、适用于微生物及部分简单真核细胞转化的仪器。其优势包括预设程序、宽参数设定、强大电压输出及可靠操作界面。对于细胞培养及转化实验，按照以上流程规范操作，从细胞培养状态、样品装载、参数优化、复苏培养，到维护保养，均可有效提升实验成功率，延长设备寿命。

建议使用者在初次上手时，先从设备预设程序和标准细胞样本入手，记录参数与结果，逐步积累经验。随着实验积累，可探索更复杂细胞系或更大体积转化。设备虽小，但细节不可忽视：务必控制细胞状态、缓冲体系、气泡、比色皿规格、电压时间等要素。稳定操作、数据记录与优化反馈，将是高效实验运行的关键。

若您后续需要“打印版操作手册”、或“针对某细胞系（如大肠杆菌、酵母、HEK293）推荐参数和操作流程”，欢迎随时告知，我可进一步协助提供。