质保3年只换不修，厂家长沙实了个验仪器制造有限公司

一、前言

伯乐电穿孔仪 165-2660 是一款高精度的基因导入设备，广泛用于真核细胞、原核细胞、酵母和植物原生质体的电穿孔实验。它通过瞬间高电压脉冲在细胞膜上形成可逆性微孔，使外源 DNA、RNA 或蛋白质进入细胞。由于该设备可实现电压、脉冲时间、电容、电阻等多参数的精确控制，因此操作步骤必须规范，以确保实验结果的准确性与可重复性。

二、实验前准备

1. 实验环境要求

• 实验台面：平稳、防震、无金属杂质，保持干燥洁净。

• 环境温度：20–25℃，湿度不超过 80%，避免冷凝。

• 电源条件：220V ±10%，接地良好，电压波动不超过 ±5%。

• 安全条件：设置防电弧罩及安全开关，操作者需经过高压设备使用培训。

2. 仪器检查

在每次开机前应完成以下检查：

• 确认电源线、接地线完好无损。

• 检查主机与 ShockPod、电容模块、脉冲控制模块接口是否牢固。

• 检查电击杯无裂纹、无液体残留。

• 确认液体不接触电极部分，防止漏电。

• 打开电源，进入自检界面，屏幕应显示系统 READY 状态。

3. 试剂与材料准备

• 细胞样品：处于对数生长期，形态均一，无死亡或污染。

• 转染质粒或核酸分子：高纯度，无蛋白和盐分残留。

• 缓冲液：使用低离子强度专用电穿孔缓冲液，如无钙无镁 PBS 或专用 electroporation buffer。

• 电击杯：根据细胞类型选择合适间隙（0.1 cm、0.2 cm 或 0.4 cm）。

三、样品制备步骤

1. 细胞收集

将培养良好的细胞离心收集，去除培养基，用冷却缓冲液洗涤 2–3 次，以降低离子浓度。

2. 浓度调整

使用电穿孔缓冲液重悬细胞，使浓度保持在 1×10⁶–1×10⁷ cells/mL 之间。过稀会降低导入率，过浓则易导致放电不均。

3. 样品混合

按实验方案将 DNA 或 RNA 溶液加入细胞悬液中，一般体积比控制在 1:9。轻轻混匀，避免剧烈震荡产生气泡。

4. 预冷与备用

若实验对温度敏感，可将细胞混合液及电击杯置于冰上预冷 5 分钟，以降低电击产生的热损伤。

四、设备安装与参数设定

1. 模块连接

1. 主机置于稳固平台上。

2. 将 ShockPod 电击槽插入主机前端接口。

3. 若需扩展功能，将 CE 模块和 PC 模块分别插入主机后面板的指定接口。

4. 确认模块连接无松动后再接通电源。

2. 开机自检

按下电源开关，系统自动检测输出电压、电容和控制模块是否正常。若屏幕显示“PASS”或“READY”，即可进入操作界面。若出现警报代码，须立即断电检查连接状态。

3. 菜单导航

仪器具有三种主要工作模式：

• 预设程序（Preset Protocol）：内置常用细胞类型参数，适合初次操作。

• 手动模式（Manual Mode）：用户可自定义电压、电容、电阻、脉冲时间。

• 用户程序（User Protocol）：可保存并重复调用的自定义参数方案。

使用上下键选择模式，按确认键进入设定界面。

4. 参数设定原则

• 电压值决定电场强度，是影响穿孔效率的关键参数。

• 电容决定能量储存量，影响脉冲持续时间。

• 电阻影响放电速度与波形衰减。

• 方波模式需设定脉冲持续时间与次数。

常规设定示例：

• 细菌：1.8–2.5 kV/cm，脉冲时间 5 ms；

• 酵母：1.0–1.5 kV/cm，时间 8–10 ms；

• 哺乳动物细胞：0.3–0.8 kV/cm，时间 10–20 ms。

所有参数设定后，按“ENTER”键确认保存。

五、正式操作步骤

1. 装样

• 将混合好的细胞-DNA 悬液加入电击杯中，体积以不超过杯容量的 80% 为宜。

• 检查液面平整，无可见气泡。

• 轻轻敲击电击杯壁以驱除微气泡。

2. 插入电击槽

• 打开 ShockPod 上盖，将电击杯水平放入插槽。

• 对准电极位置，插入到底。

• 合上安全盖后，仪器自动检测闭合状态，屏幕显示“Cuvette Ready”。

3. 执行电穿孔

• 按下“PULSE”键，系统开始充电。

• 当屏幕提示“READY TO PULSE”时，按下确认键，瞬间放电完成穿孔。

• 放电过程仅持续数毫秒，屏幕会显示电压曲线、时间常数等参数。

• 操作人员应站在安全线外，避免靠近电击槽。

4. 电击后处理

• 电击结束后，等待设备提示“COMPLETE”后方可取出电击杯。

• 用无菌吸管立即将样品吸出，转移至预温培养基中。

• 在适宜温度下恢复细胞活性（30–37℃，0.5–2 小时）。

• 若为细菌或酵母，可直接进行培养或涂布筛选。

5. 多脉冲操作

在方波模式下，可设定多次脉冲：

• 选择“MULTI-PULSE”选项，输入脉冲次数与间隔。

• 通常 2–3 次脉冲即可，不宜过多。

• 间隔时间建议 3–5 秒，以利细胞膜修复。

6. 数据记录

完成电穿孔后，仪器自动保存电压、电流、时间常数等数据，可在菜单中查看或导出至外部存储。

六、操作注意事项

1. 防止电弧
   样品若含盐量高或存在气泡，极易产生电弧放电，导致样品烧毁。必须使用低盐缓冲液并检查液面无气泡。

2. 防止过热
   高电压会造成瞬时发热，尤其在高浓度样品中。预冷电击杯或分批操作可有效降低热损伤。

3. 保持电极清洁
   每次操作后用去离子水冲洗电击杯电极面，防止盐结晶影响导电性能。

4. 安全距离
   放电瞬间禁止触摸主机前端及电击槽区域，防止高压伤害。

5. 重复实验前的放电
   连续多次实验时，须等待设备内部电容完全放电（约 10 秒），否则可能造成电压叠加。

七、实验后处理

1. 样品恢复培养
   电击后立即加入恢复培养基，使细胞在适温下培养，以修复细胞膜并表达外源基因。

2. 电击杯清洁
   使用完毕的电击杯用去离子水彻底冲洗，晾干后可重复使用 2–3 次。若出现裂纹或变色应立即更换。

3. 仪器清洁与关机

• 用干布擦拭仪器外壳，保持无尘。

• 关闭电源开关并拔出插头。

• 不得使用有机溶剂清洁，以防腐蚀外壳。

4. 数据整理
   将每次实验的参数、电压、电流及转染效果记录在实验日志中，便于条件优化。

八、常见问题与排查

九、安全提示

• 本设备属于高压仪器，非操作人员禁止接触。

• 操作时双手保持干燥，避免触电风险。

• 实验结束后应立即断电，不得让设备长时间待机。

• 若出现异常声音、烟雾或异味，应立刻停止使用并报告维护人员。

• 定期由专业技术人员进行安全检测与校准。

十、维护与保养

1. 每周检查电极接头、电源插座是否松动。

2. 每三个月检查主机风扇及通气孔是否通畅。

3. 每半年由厂家进行一次性能校准，保证输出精度。

4. 设备闲置时用防尘罩覆盖，避免灰尘进入。

5. 电容模块属于高能元件，若出现鼓包或漏液迹象，应停止使用并更换。

十一、操作优化技巧

1. 梯度实验法
   初次使用某种细胞时，可从低电压逐步递增，以确定最佳条件。

2. 温度控制法
   对温度敏感细胞可采用冰上操作，减少热损伤。

3. 多次小体积法
   对大规模转染实验可分批进行多次小体积操作，提高成功率。

4. 缓冲液预处理法
   使用前将缓冲液过滤除菌并平衡至室温，防止温差影响电导。

5. 记录优化
   每次实验详细记录电压、电容、细胞密度、DNA 量及结果，以便形成实验数据库。

十二、结束与存储

操作完毕后应按照以下顺序关闭仪器：

1. 退出操作界面，按下“POWER”键关闭主机。

2. 拔除电源插头。

3. 断开模块与主机的连接。

4. 将 ShockPod、电击杯清洗干净晾干。

5. 整体置于干燥柜保存，避免潮湿。

十三、质量与售后

伯乐电穿孔仪 165-2660 由长沙实了个验仪器制造有限公司生产，出厂前经过严格检测，符合国家实验室设备安全标准。产品享受 三年质保，只换不修 服务政策。若在使用期间出现任何性能异常，厂家将提供整机更换支持。售后中心同时提供：

• 免费技术培训与参数优化指导；

• 定期校准与安全检测；

• 长期零部件供应与升级服务。