伯乐电穿孔仪165-2660操作指南

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质保3年只换不修，厂家长沙实了个验仪器制造有限公司

一、概述

伯乐（Bio-Rad）电穿孔仪165-2660是一款专为生命科学研究设计的高性能电转化设备，广泛应用于细菌、酵母、哺乳动物细胞、植物原生质体及真核体系的基因导入实验。
其核心原理是利用瞬时高压脉冲在细胞膜上形成可逆性微孔，使外源DNA、RNA或蛋白质进入细胞内部，从而实现转化或转染。

该设备以高精度电压控制、稳定的放电波形及灵活的参数设置而著称，支持0.2–2.5 kV电压范围、25–3300 µF电容范围及多模式脉冲输出。
为确保实验效果的可靠性和安全性，操作人员应严格遵守规范化的操作流程，正确设置参数并妥善维护仪器。

本指南详细介绍伯乐165-2660的操作步骤、参数调整、实验准备、常见问题及安全注意事项，旨在帮助科研人员高效掌握仪器操作方法并获得最佳实验结果。

二、仪器组成与功能简介

1. 主机系统

主机是整个设备的控制中心，内部集成高压电源、控制电路和能量释放系统。主要功能包括电压设定、电容调节、脉冲输出、时间常数计算与安全监控。

2. 操作面板

显示屏：实时显示电压、电容、时间常数、脉冲次数等信息；
旋钮与按键：用于输入参数、启动放电及保存设置；
指示灯：显示设备工作状态，如“Ready”“Pulse”“Error”。

3. 电极接口与安全盖

电极槽用于连接电转杯，安全盖配有联锁保护功能，未关闭盖时系统无法输出高压，确保操作安全。

4. 主要附件

电转杯（0.1 cm、0.2 cm、0.4 cm三种间隙）
高压连接线
样品支架与冷却模块
接地线与防尘罩

三、实验准备

1. 环境条件

温度：20–25°C；湿度：≤60%；
电源要求：220V ±10%，接地良好；
操作台保持干燥清洁，远离水源与电磁干扰源。

2. 仪器检查

在每次使用前，检查以下项目：

电源线连接是否牢固；
电极槽与电转杯是否清洁干燥；
安全盖感应开关功能是否正常；
屏幕显示与按键响应是否正常；
上次实验后的残余电荷已完全释放。

若发现异常，如屏幕闪烁或“Error”提示，应立即停止使用并联系技术人员。

3. 样品准备

细胞要求：

细胞需处于生理活跃期或对数生长期；
通过离心去除培养基并用低离子缓冲液洗涤3–4次；
样品悬液导电性低于5 µS/cm，以防放电不稳；
样品浓度控制在1×10⁸ cells/mL左右。

DNA/RNA要求：

纯度高，A260/A280比值在1.8–2.0；
无盐、无乙醇残留；
浓度一般为10–100 ng/µL。

四、操作步骤

步骤一：开机与系统初始化

接通电源，设备自动进行系统自检；
确认显示屏出现“Bio-Rad 165-2660 Ready”；
检查风扇运转与指示灯状态，确保设备处于待机模式。

步骤二：参数设定

按下 “Parameter” 键进入设置菜单，依次设定以下参数：

电压（Voltage）：根据细胞类型选择

细菌：2.3–2.5 kV
酵母：1.0–1.5 kV
哺乳细胞：0.25–0.8 kV
植物原生质体：0.6–1.0 kV

电容（Capacitance）：

范围：25–3300 µF
推荐：细菌25 µF、酵母50 µF、哺乳细胞250 µF、原生质体1000 µF

脉冲次数（Pulse）：

单脉冲用于细菌与酵母；
双脉冲用于真核细胞转染（间隔100 ms）。

时间常数显示（τ）：系统自动计算并在放电后显示，理想值为4–10 ms。

设置完成后，按下 “Enter” 键确认并返回主界面。

步骤三：样品装载

将处理好的细胞与DNA混合液加入电转杯，体积约为80–100 µL；
轻轻敲击杯壁，确保无气泡；
将电转杯置于冷却模块中预冷约1分钟；
插入主机电极槽，确保卡入定位槽；
关闭安全盖，屏幕显示“Ready”。

步骤四：放电操作

按下 “Pulse” 或 “Start” 键，设备发出短促提示音；
放电瞬间屏幕显示实际电压与时间常数；
放电完成后系统自动放电，等待数秒，屏幕恢复“Ready”。

若出现“ARC DETECTED”提示，说明样品中存在电弧放电，应重新洗涤细胞或更换缓冲液。

步骤五：样品复苏

立即使用无菌移液器吸出样品，加入适宜培养基复苏：

细菌：加入SOC培养基，在37°C摇床复苏1小时；
酵母：在30°C培养30–60分钟；
哺乳细胞：转移至含血清培养基中静置复苏2小时；
植物原生质体：放入等渗液中静置12小时。

五、实验参数参考

细胞类型	电压（kV）	电容（µF）	电转杯间隙（cm）	时间常数（ms）
大肠杆菌	2.5	25	0.2	4–5
酵母	1.2	50	0.2	6–8
哺乳动物细胞	0.45	250	0.4	8–10
植物原生质体	0.8	1000	0.4	10–12
放线菌	1.5	100	0.2	5–7

可根据实验目标适当微调参数，优化结果。

六、实验后处理

1. 电极与杯体清洁

放电结束后等待30秒，让设备自动放电完毕；
用无离子水冲洗电极槽与电转杯；
必要时使用70%乙醇清洗并自然晾干；
不得使用强酸或金属刷清洁。

2. 数据记录

记录实验条件与结果，包括：

电压、电容、时间常数；
样品类型与浓度；
转化效率与复苏情况。

165-2660具备自动记录功能，可存储最近1000次实验数据。

3. 仪器关机与维护

按下 “Power Off” 键关闭设备；
断开电源线与接地线；
用干布擦拭仪器外壳；
覆盖防尘罩存放。

七、安全注意事项

放电前务必确保安全盖关闭，否则系统将拒绝输出。
禁止在设备带电状态下插拔电转杯或连接线。
不得使用含盐或导电性高的缓冲液，以防电弧放电。
放电后需等待数秒，确保残余电荷完全释放。
避免连续放电超过10次，应间隔30秒以上防止过热。
操作时佩戴绝缘手套并保持实验环境干燥。
若设备发出异响或有异味，应立即断电检查。

八、常见问题及解决方法

问题	可能原因	解决办法
放电失败	安全盖未关闭或电极未接触	检查安全盖与电转杯位置
电弧放电	样品中有气泡或盐分过高	重新洗涤样品并排气泡
时间常数过低	电阻过小或缓冲液导电性高	更换低离子缓冲液
时间常数过高	电容过大或样品体积过小	调整电容或增加样品体积
转化效率低	电压不足或细胞状态差	提高电压或使用新鲜样品
样品过热	放电间隔太短	延长间隔或使用冷却模块