质保3年只换不修，厂家长沙实了个验仪器制造有限公司。

一、概述与适用对象
伯乐电穿孔1652100是一款面向微生物与基础分子克隆实验的台式电穿孔设备，特点是结构紧凑、操作简洁、参数调用迅速、重复性好。更适合细菌与酵母等微生物的质粒转化、线性DNA导入、标记染料或小分子进入等场景。本文提供一份从准备到收尾的完整操作步骤与配套表格建议，帮助新手快速掌握、老手稳定发挥。

二、上机前准备（环境与物料）

1. 实验环境

• 台面干燥、整洁，远离明水与强腐蚀性试剂。

• 佩戴护目镜、绝缘手套、实验服。

• 预留稳定电源插座，避免与大功率设备共插一排造成电压波动。

1. 设备与耗材

• 1652100主机、电极连接线、电击杯架。

• 电穿孔比色杯（0.1 cm与0.2 cm常用，原装或同规格兼容一次性杯）。

• 细胞电穿孔缓冲液（低离子强度），无菌离心管。

• 质粒或线性DNA/环状DNA、RNA或其他待导入分子。

• 复苏培养基、培养皿或选择性平板。

1. 温控与预处理

• 比色杯置冰上或4℃冷藏预冷30分钟以上。

• 缓冲液与细胞悬液同温，减少温差应激。

• 复苏培养基预温至适宜温度（如37℃）。

三、样本制备（细胞与核酸）

1. 细胞状态

• 细菌或酵母处于对数生长期，活力高，细胞壁/膜完整。

• 充分去除高盐培养基：离心收集后以去离子水或低离子电穿孔缓冲液洗涤2–3次。

1. 细胞浓度

• 细菌：常见范围约1×10⁹ cells/mL；酵母可略低。根据经验与后续转化效率微调。

1. 核酸样品

• 质粒纯度高、无盐离子残留、无内毒素干扰；浓度与总量按菌株经验值配置。

• 混合前轻柔操作，避免剧烈吹打产生气泡。

四、装杯与体积建议

1. 选择杯隙

• 0.1 cm杯：电场强，常用于细菌小体积高效率转化。

• 0.2 cm杯：电场较缓，适合对电击较敏感的微生物或需要稍大体积的样本。

1. 上样体积

• 0.1 cm杯建议40–60 μL；0.2 cm杯建议50–100 μL。保持液面平整，避免气泡。

1. 操作要点

• 预冷后的杯体从冰上取下，迅速加入细胞与核酸混合液，轻弹底部排泡。

• 擦拭杯外壁，确保干燥再插入杯槽，防止表面导电造成电弧。

五、设备开机与自检

1. 接通电源并开机，观察屏幕与指示灯是否正常。

2. 检查电极线连接稳固、杯架清洁、杯槽内无异物与水渍。

3. 空载自检：无需插杯，执行待机检测，确认主机无报警信息。

六、程序选择与参数设定

1. 预设程序

• 1652100为微生物优化过的预设档，适合大肠杆菌、酵母等常见对象。选择对应程序可快速获得可重复结果。

1. 手动参数

• 需要微调时，可根据菌株、杯隙、缓冲与体积调整电压与脉冲时间常数目标区间。

• 原则：新菌株先保守，优先保障存活率，再逐步提高电场强度。

1. 记录表

• 在操作前于记录表写明：日期、菌株/细胞、杯隙、体积、核酸量、所用程序或参数、操作者签名。

七、施加脉冲的标准步骤

1. 插杯

• 将装有样本的电击杯沿正确方向插入杯槽，压紧就位。确保杯壁干燥、无液体外溢。

1. 安全确认

• 盖好防护盖或放下杯架护罩，确认周围人员知悉将施加高压。

1. 触发脉冲

• 按下触发键。过程中不要触碰杯体与电极。

1. 读取反馈

• 脉冲结束后，屏幕会显示关键反馈值（如电压读数、时间常数）。及时记录。

1. 取杯转移

• 迅速取出杯体，用无菌移液器将样本移入复苏培养基或目标体系。对细菌，可立即37℃振荡复苏；对酵母，按相应条件温育。

八、脉冲后处理与复苏

1. 细菌样本

• 通常复苏30–60分钟后涂布对应抗性平板，倒置培养。

1. 酵母样本

• 复苏时间可适当延长，视菌株耐受情况而定。

1. 注意事项

• 复苏期间轻柔混匀，避免剪切损伤。

• 需要时设置空白对照与化学法对照，用于评估电穿孔优势与背景。

九、培养、计数与效率评估

1. 平板培养

• 选择性培养基、适宜温度与时间。

1. 计数与记录

• 统计菌落数或筛到的阳性克隆数，记录至操作表。

1. 计算与比较

• 换算转化效率并与以往参数、不同杯隙、不同体积进行纵向对比，形成实验室自有经验曲线。

十、安全要点与风险控制

1. 防电弧

• 杯外壁干燥、无盐液残留、无气泡。

• 体积不过量，避免液面上翻触及杯盖内壁。

1. 防触电

• 施加脉冲时手离开杯体与电极，严禁开启保护罩。

1. 防过热

• 连续多次脉冲需间隔，让设备电容与电源模块散热，延长寿命。

1. 生物安全

• 对转化物、质粒与菌株进行合规标识与分类管理，废弃物按规程处置。

十一、常见问题与快速排查

1. 电弧或报警

• 可能因杯外壁潮湿、样本导电性过强、杯内有气泡。解决：擦干杯体、更换低离子缓冲、重新上样排泡、适度减少体积。

1. 转化效率低

• 可能因细胞状态差、DNA纯度不足、参数偏保守或过激。解决：用对数期细胞、提升DNA质量、逐步优化电压与杯隙、缩短或微调脉冲目标。

1. 无菌落或全部阴性

• 排查选择性压力是否过强、平板是否失效、复苏是否充分、DNA是否降解。

1. 屏幕无显示或键无响应

• 检查电源、保险丝与连接线；断电静置后重启。若重复出现，停止使用并联系售后更换。

1. 时间常数异常飘忽

• 多与导电性、杯隙与体积有关，重新制备样本，记录对照以确认问题在样本或耗材而非设备。

十二、参数优化的实务路径

1. 单变量法

• 在固定菌株与缓冲条件下，仅改变电压或杯隙，观察效率与存活率变化。

1. 体积与浓度

• 同步考察样本体积与细胞密度，对电场均匀性与热效应影响显著。

1. 复苏条件

• 不同菌株对复苏时间与温度敏感度不同，设置2–3档并行评估。

1. 统计与沉淀

• 连续3–5批次取均值，更能反映参数真趋势。把“好用”的参数固化为实验室SOP版本号，便于新成员直接采用。

十三、维护保养与周期检查

1. 日常清洁

• 断电状态下，用70%酒精擦拭外壳与杯槽表面，严禁强溶剂。

1. 电极与杯槽

• 定期观察有无氧化、积尘或液体渗漏痕迹，若有异常立即停机处理。

1. 散热与间歇

• 高频使用安排合理间隔，避免过热。

1. 记录与追踪

• 建立设备台账：使用日期、累计次数、异常事件、维护时间节点。

1. 校核建议

• 每月进行一次输出一致性核查（对比历史反馈值），每季度做一次全面状态巡检。

十四、规范化文档与可追溯管理

1. 标准操作卡（建议贴在设备旁）

• 准备清单 → 安全检查 → 选杯装样 → 设定程序 → 脉冲 → 复苏 → 培养 → 记录。

1. 记录表核心字段

• 日期、操作者、菌株/细胞、杯隙与体积、缓冲类型、DNA信息、程序/参数、脉冲反馈值、复苏与培养条件、结果与备注。

1. 版本管理

• SOP标注版本号与生效日期，变更要点以“修订记录”形式留痕。

十五、完整操作示例（范式）

1. 准备阶段

• 预冷0.1 cm杯与缓冲液，离心收集对数期细胞并低离子洗涤，调至目标浓度。

• 配好高纯度质粒，核酸总量按经验范围配置。

1. 装杯

• 取40–60 μL细胞核酸混合液入预冷杯，轻弹排泡，擦干外壁。

1. 设定

• 选择对应该菌株的预设程序；首次尝试使用保守档位。

1. 脉冲

• 插杯、合上护罩，触发脉冲；记录反馈值。

1. 转移与复苏

• 立即转入预温复苏液，轻柔混匀，振荡培养至30–60分钟。

1. 上板与培养

• 涂布选择平板或接种液体培养，标记清楚，按温度与时间培养。

1. 评估

• 计数菌落或检测阳性克隆，计算效率，填写记录表，与历史参数比对。

1. 收尾

• 断电、清洁、归还耗材，更新台账与SOP优化建议。

十六、质量与结果提升的关键细节

• 核酸纯度与缓冲离子强度是效率与电弧发生的决定因素。

• 杯隙与体积影响电场强度与均匀性，先从小体积与较小杯隙切入更稳妥。

• 冰上操作减少热损伤，但复苏应迅速过渡到最适温度。

• 通过空白对照、化学法对照建立参照坐标，客观评估电穿孔收益。

• 定期回顾“失败样本”并归因，形成内部FAQ库。

十七、设备故障处理与质保对接

• 若遇到无法自排的故障（反复报警、无显示、反馈值异常且与样本无关），立即停止使用，拍照留存界面信息与操作环境，记录日期与批次。

• 在质保期内按“只换不修”的方式对接更换，保留发票、序列号、问题描述与排查步骤。

• 更换后进行一次基线测试，确认新设备输出一致、反馈稳定，再恢复常规实验。

十八、结语
1652100在微生物电转化中的优势体现在操作友好、参数可复制、效率提升、维护轻量。遵循以上操作步骤与记录规范，能显著降低新手学习曲线，提升批次稳定性与成功率。把安全与质量控制前移，把优化与复盘固化为SOP的日常部分，实验室即可建立起可靠的电穿孔工作流，在保障人员与设备安全的前提下，持续输出稳定、可验证的结果。