伯乐电穿孔仪165-2661操作流程

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质保3年只换不修，厂家长沙实了个验仪器制造有限公司

一、概述

伯乐电穿孔仪 165-2661 是一种高精度、高安全性电击转化设备，广泛应用于分子生物学、细胞工程、基因导入、蛋白递送以及药物载体研究等实验领域。
其操作流程涵盖样品准备、参数设定、电击执行、数据记录与设备维护等多个阶段。
规范操作不仅能保证实验成功率，还能延长仪器使用寿命并保障操作安全。

本指南详细阐述165-2661的标准操作流程、关键步骤、注意事项及实验优化方法，为科研人员提供可直接执行的标准化参考。

二、操作前准备

1. 实验环境要求

室温保持在 20–25 ℃，相对湿度 ≤ 70%；
台面应平整、干燥、防静电；
周围避免放置高频电磁设备；
保证良好通风，防止高压放电产生臭氧积聚；
照明充足，便于观察样品状态。

2. 仪器检查

开机前依次完成以下检查：

检查电源线连接牢固，接地线无损；
电源规格：AC 220 V ±10%，50/60 Hz；
观察 ShockPod 电击槽干燥、清洁、无盐渍；
电击杯无裂痕、无残留液体；
控制面板按键灵敏、显示正常；
风扇运转平稳、通风口无堵塞；
接通电源后系统自动自检，显示 SELF TEST PASSED；
若出现 FAULT 或报警声，立即停止操作并检查模块。

3. 样品准备

（1）细胞制备

取对数生长期细胞，保证细胞活性高；
采用去离子水或低离子缓冲液（如无盐HEPES缓冲液）洗涤三次；
最后以低导电缓冲液重悬，电导率控制在 0.5–1.5 mS/cm；
细胞浓度参考：

E. coli：约 1×10⁹ cells/mL
酵母：约 1×10⁸ cells/mL
哺乳动物细胞：约 10⁶–10⁷ cells/mL

（2）外源DNA/RNA制备

DNA应高纯度、无蛋白或盐分污染；
体积一般为 1–5 µL；
建议预冷至 4 ℃ 备用。

（3）样品预冷

细胞悬液与电击杯一并置于冰上 10 分钟；
有助于减少热损伤，提高细胞存活率。

三、开机与系统初始化

打开电源开关，仪器自动检测高压模块、电容、电阻与温控系统；
显示屏出现主菜单，默认显示上次使用参数；
READY 指示灯亮起，表示系统处于待机状态；
若出现异常信息（如过温、盖锁未闭合），根据提示排查后重新启动。

四、参数设置流程

1. 进入操作菜单

按 “MENU” 键进入参数设置界面，可选择：

Manual Setup：手动设定实验参数；
Preset Protocol：调用已保存方案。

2. 设置关键参数

参数项	范围 / 单位	推荐值（典型）	功能说明
Voltage 电压	10–3500 V	细菌 2000 V；哺乳动物 600 V	决定电场强度
Capacitance 电容	25–3275 µF	细菌 25 µF；酵母 500 µF；哺乳动物 800 µF	控制能量释放速率
Resistance 电阻	50–600 Ω（自动）	默认 Auto	控制放电时间常数
Pulse Type 波形	Exponential / Square	Exponential	依据细胞类型选择
Pulse Count 次数	1–10	一般 1；哺乳动物可 2–3	控制电击次数
Interval 间隔	0.5–2 s	默认 1 s	多次脉冲间休息时间

设置完成后按 “SAVE” 保存方案，以便重复实验调用。

五、样品装载步骤

选用匹配电击杯：

0.1 cm 间距：高电压、小体积；
0.2 cm 间距：常用通用型；
0.4 cm 间距：适合动物细胞。

将样品液体吸入电击杯，体积为推荐容量的 70–80%；
检查是否有气泡，如有可轻拍去除；
用无绒纸擦拭外壁残液，防止短路；
将电击杯放入 ShockPod 槽内；
轻压盖子直至“咔哒”声，系统检测盖锁闭合并显示 “LID CLOSED”。

六、电击执行流程

步骤 1：充电准备

按下 “PULSE” 键开始充电；
屏幕提示 “CHARGING …”；
当电压达到设定值，显示 “READY TO PULSE”。

步骤 2：执行放电

按 “ENTER” 键触发电击；
屏幕实时显示放电电压、电流及时间常数 τ；
放电持续数毫秒后自动结束；
状态显示 “COMPLETE”；
系统自动进行放电能量释放与冷却（约 10 秒）。

步骤 3：结束提示

READY 灯重新亮起，表示放电完成；
可安全打开盖子并取出电击杯。

七、样品回收与培养

待 10 秒确认无残余电压后取出电击杯；
立即将样品加入恢复培养基中；
轻轻混匀避免剧烈振荡；
按下表进行培养恢复：

样品类型	培养基	温度 / 时间
E. coli	SOC 培养基	37 ℃，45 分钟
酵母	YPD 培养基	30 ℃，1 小时
动物细胞	完全培养基	37 ℃，5% CO₂，2 小时
植物原生质体	甘露醇缓冲液	25 ℃，1 小时

八、实验数据记录

1. 自动数据采集

每次放电后，系统自动记录：

实际电压、电容、电阻；
时间常数 τ；
能量释放率（%）；
放电次数与波形类型；
模块温度与日期。

2. 数据导出

插入 USB 存储设备；
菜单选择 “Data → Export”；
系统生成 .csv 文件；
文件名含实验日期与编号，可在 Excel 中查看。

3. 数据分析要点

比较设定与实测电压偏差（应 ≤2%）；
计算时间常数 τ 是否符合目标范围（4–8 ms 为最佳）；
检查能量释放是否正常（≥90%）；
异常数据应记录备注原因。

九、安全规范

操作前确认盖锁闭合；
放电过程中严禁触碰 ShockPod；
样品不得含盐或导电杂质；
放电后等待 10 秒再取样；
严禁连续多次放电，间隔 ≥10 秒；
仪器周围保持干燥无液体；
遇异常（如闪光、异味、噪音）立即断电；
不得在开启盖子的状态下充电或放电；
维修或校准必须由专业人员进行。

十、实验结束后的清理与维护

1. 日常清理

关闭电源，等待系统放电完成；
拔掉电源线；
用无水乙醇擦拭 ShockPod 内部及电击杯表面；
干燥后放置在无尘环境中。

2. 定期维护

项目	频率	内容
电源系统	每 3 个月	检查稳压与接地情况
电容模块	每 6 个月	校准容量值
ShockPod	每月	清洁触点、防腐蚀
风扇与过滤网	每季度	清理灰尘
接地电阻	每年	≤ 1 Ω
系统校准	每年	完整电压、电容检测

3. 储存条件

环境温度 10–35 ℃；
相对湿度 ≤ 70%；
远离阳光直射与腐蚀性气体；
ShockPod 与电击杯单独密封保存。

十一、常见问题与排查

问题	可能原因	解决措施
无法放电	盖锁未闭合 / ShockPod 接触不良	重新锁盖或清洁触点
放电电弧	样品含盐 / 有气泡	重新制备样品并排气泡
电压偏低	电源不稳 / 电容老化	检查电源或更换模块
时间常数偏差大	电阻匹配异常	启用自动匹配模式
无显示或黑屏	控制电路松动	关闭电源检查连接线
异常噪声	风扇积尘 / 散热不良	清理通风口