质保3年只换不修，厂家长沙实了个验仪器制造有限公司

一、概述

伯乐电穿孔仪 165-2660 是一种高性能、高精度的电转化设备，广泛应用于基因导入、细胞融合及分子递送实验中。
该仪器通过高压脉冲在细胞膜上产生瞬时可逆微孔，使外源 DNA、RNA 或蛋白质进入细胞内部。
在整个实验过程中，操作的规范性直接决定实验结果的成功率与重复性。

电穿孔操作看似简洁，实则对参数设置、样品处理和操作顺序要求极高。
正确掌握操作要点不仅能提高转化效率，还能有效避免电弧、设备损坏或样品死亡。

二、实验前准备要点

1. 环境准备

• 实验环境需保持干燥、整洁、无粉尘。

• 电源应为独立接地插座，电压 220V ±10%，频率 50/60Hz。

• 工作台表面平整、防震，远离高压设备及金属导体。

• 环境温度控制在 20–25℃，相对湿度 ≤80%。

• 电穿孔操作应在生物安全柜或洁净区域内完成，以防污染。

2. 设备检查

在开机前，必须进行以下检查：

1. 电源线及接地线完好，无破损。

2. ShockPod 电击槽内干燥、无液体残留。

3. 电击杯清洁无裂纹，电极表面光滑。

4. 模块连接牢固，显示屏完好。

5. 打开电源后自检正常，屏幕显示“READY”方可操作。

若发现异常（如错误代码、风扇停转、界面无响应），应立即停止使用并排查。

3. 样品准备

1. 选择对数生长期的细胞，确保活性高、状态健康。

2. 用低盐缓冲液洗涤 2–3 次，去除培养基中的离子。

3. 调整细胞浓度：

• 细菌：1×10⁹ cells/mL；

• 酵母：1×10⁸ cells/mL；

• 哺乳动物细胞：1×10⁶–1×10⁷ cells/mL。

4. 加入 DNA/RNA 溶液后轻轻混匀，避免剧烈振荡。

5. 预冷样品与电击杯 5 分钟，降低热损伤。

三、开机与系统初始化

1. 打开电源开关，等待系统自检完成。

2. 检查液晶屏显示是否正常，确认系统进入主界面。

3. 若使用 CE 或 PC 模块，确认仪器识别成功。

4. 进入所需操作模式：

• Preset Protocol（预设程序）：选择系统默认细胞类型参数；

• Manual Setup（手动模式）：自行设置参数；

• User Program（用户程序）：加载已保存的实验方案。

四、参数设置要点

1. 电压设定

• 电压决定电场强度，是影响穿孔效果的核心参数。

• 典型范围：10–3000 V。

• 推荐范围：

• 细菌：1800–2500 V；

• 酵母：1000–1500 V；

• 哺乳动物细胞：300–800 V。

设定电压时应与电击杯间隙匹配（0.1/0.2/0.4 cm），保持适当电场强度。

2. 电容与电阻

• 电容范围：25–3275 μF，可调节能量释放速率；

• 电阻范围：50–1000 Ω 或 ∞（开路）。

时间常数 τ = R × C，用于评估电压衰减速度。
常见时间常数值为 4–7 ms（细菌）或 2–5 ms（真核细胞）。

3. 波形选择

• 指数衰减波（Exponential Decay）：适合细菌、酵母、植物原生质体；

• 方波（Square Wave）：适合哺乳动物细胞。

4. 脉冲时间与次数

方波模式下可设置单次脉冲时间（0.05–10 ms）与次数（1–10 次）。
多脉冲模式对细胞损伤小，适合敏感细胞。

5. 保存与调用

设定完成后按“ENTER”确认，可通过“SAVE”保存参数组，方便下次调用。

五、装样与放电操作要点

1. 样品装入

1. 将 100–400 μL 样品加入电击杯。

2. 轻敲杯壁排除气泡，保持液面平整。

3. 确认液体不溢出杯口。

4. 将电击杯放入 ShockPod 槽内，确保与电极完全接触。

2. 安全检测

盖上 ShockPod 上盖，仪器自动检测闭锁状态。
若未闭合，屏幕提示“ERR01：盖未闭合”。

3. 放电步骤

1. 按“PULSE”键进入充电状态，屏幕显示“CHARGING”。

2. 当提示“READY TO PULSE”时，按“ENTER”执行放电。

3. 放电瞬间完成，仪器自动显示输出电压、时间常数、能量释放百分比。

4. 待屏幕显示“COMPLETE”后，方可取出电击杯。

4. 放电过程注意事项

• 放电时严禁触碰仪器和电击槽；

• 不可打开上盖或移动样品；

• 若出现闪光或异常声响，应立即停止实验；

• 不得连续高压放电超过 10 次，防止温度过高。

六、样品回收与后处理

1. 放电完成后，使用无菌移液器立即将样品转移至恢复培养基中。

2. 对细菌样品，恢复时间一般为 30 min；哺乳动物细胞为 1–2 h。

3. 电击杯应用去离子水清洗后晾干备用。

4. 若出现液体溢出，应使用无尘纸擦拭 ShockPod 内壁。

七、数据读取与记录要点

伯乐电穿孔仪 165-2660 自动显示以下数据：

• 输出电压（V）

• 时间常数（τ）

• 样品电阻（Ω）

• 能量释放百分比（%）

• 波形类型与脉冲次数

这些数据应记录在实验日志中，形成可追溯文件。

数据导出步骤：

1. 插入 USB 存储设备；

2. 进入菜单 “Data Export”；

3. 选择文件格式（CSV 或 TXT）；

4. 导出并保存至计算机。

八、常见操作误区与防范要点

九、安全操作要点

1. 操作者需经过高压设备使用培训。

2. 放电时严禁触摸电击槽与电极部分。

3. 保持设备干燥，避免液体进入内部。

4. 不得使用金属镊子接触电击杯电极。

5. 每次实验结束后，关闭电源并拔掉电源线。

6. 若出现异味或烟雾，立即切断电源。

7. 不得擅自拆机或改装。

十、实验优化要点

1. 电压优化

采用逐级提升法，观察转化率与存活率，找到最佳平衡点。

2. 缓冲液优化

使用低离子强度缓冲液，如无钙无镁 PBS 或专用 electroporation buffer，可显著减少电弧。

3. 温度控制

在冰上操作并保持样品低温，防止过热导致细胞死亡。

4. 细胞浓度调整

保持合适浓度，避免团聚或电流过大。

5. 电击杯选择

不同间隙对应不同电场强度，应根据细胞体积选择合适型号。

6. 多脉冲策略

对于真核细胞，可使用 2–3 次低电压脉冲提高导入效率。

十一、实验后清理与维护要点

1. 关闭电源，等待 10 秒以释放残余电荷。

2. 清洁 ShockPod 槽，用干布擦拭，保持干燥。

3. 电击杯用去离子水冲洗三次并晾干。

4. 外壳用无水乙醇或湿布轻拭，避免使用腐蚀性溶剂。

5. 每月检查通风口与风扇是否正常运转。

6. 每三个月进行一次电压校准。

7. 长期不使用时，覆盖防尘罩并置于干燥环境中。

十二、效率提升与质量控制要点

1. 重复实验验证：相同参数重复 3 次，结果差异 ≤10% 为合格。

2. 记录制度：保存电压、电容、时间常数等关键参数。

3. 对照实验：每批实验设阴性对照（无 DNA）与阳性对照（已验证条件）。

4. 数据分析：绘制电压—效率曲线或时间常数分布图，寻找最佳参数区。

5. 设备监控：定期导出系统日志，查看放电记录。

十三、常见问题与排查要点

十四、操作流程总结

1. 检查仪器与环境 → 确认电源、盖锁、接口安全。

2. 准备样品 → 细胞状态良好，使用低盐缓冲液。

3. 设置参数 → 选择合适电压、波形与电容。

4. 加样与放电 → 排气泡，盖紧上盖，执行脉冲。

5. 数据记录 → 保存实验参数与结果。

6. 样品恢复 → 立即加入培养基恢复。

7. 设备清理 → 断电、清洁、晾干、覆盖防尘罩。