质保3年只换不修，厂家长沙实了个验仪器制造有限公司

一、概述

伯乐电穿孔仪 165-2661 是一种高精度脉冲电转化仪器，广泛应用于基因导入、细胞转染、蛋白质递送及药物电穿孔等生物实验。
其原理是利用高压脉冲瞬间改变细胞膜电位，使膜产生可逆微孔，从而使外源分子（如 DNA、RNA、蛋白质或小分子药物）进入细胞内部。

为保证实验成功率与数据可重复性，必须严格遵守标准实验方法与参数设定。
本章节系统介绍 165-2661 型电穿孔仪的完整实验流程，涵盖前期准备、运行操作、样品恢复、数据记录与结果分析。

二、实验原理与流程概览

电穿孔实验主要包括四个阶段：

1. 样品准备阶段：制备细胞与外源分子混合液，调整电导率。

2. 电击阶段：在仪器中施加短暂高压脉冲，使细胞膜瞬时穿孔。

3. 恢复阶段：电击后细胞膜修复并保留外源分子。

4. 验证阶段：检测基因导入效率或表达结果。

伯乐 165-2661 通过高精度电压、电容与波形控制模块，实现能量稳定释放与最小化热效应，确保细胞生存率与转化效率的平衡。

三、实验前准备

1. 实验环境

• 室温控制在 20–25℃；

• 相对湿度 30–60%；

• 工作台保持干燥、无振动、无强电磁干扰；

• 电源电压稳定（220V ±10%），接地电阻 ≤1 Ω；

• 实验区应避免强光直射与空气流动。

2. 仪器检查

在运行实验前，需完成以下检查步骤：

1. 主机外观检查：确认外壳无裂痕、按键正常；

2. ShockPod 检查：电击槽干燥、无水迹或残留液体；

3. 电击杯检查：电极无氧化、无裂纹；

4. 风扇与通风口：确保通畅；

5. 电源线：接地牢固无损；

6. 自检程序：开机后仪器显示“READY”表示状态正常。

3. 样品准备

（1）细胞准备

• 选取健康、处于对数生长期的细胞；

• 细胞浓度建议为：

• 细菌：1×10⁹ cells/mL；

• 酵母：1×10⁸ cells/mL；

• 哺乳动物细胞：1×10⁶–1×10⁷ cells/mL。

（2）缓冲液准备

电穿孔缓冲液应为低离子溶液，以减少电弧风险。

推荐配方：

• 1 mM HEPES，pH 7.2；

• 或无离子 PBS 稀释液。

禁止使用：含盐培养基或高离子强度溶液（如 LB、DMEM）。

（3）外源分子准备

• DNA 或 RNA 需纯度高、无蛋白污染；

• 建议使用无盐浓缩液（如乙醇沉淀后复溶于纯水）；

• 蛋白或药物分子应预冷保存并避光。

（4）样品混合

在无菌条件下，将细胞与外源分子按比例混合：

轻轻混匀后放置冰上 5 分钟。

四、实验步骤

（一）电击前准备

1. 选择与样品体积匹配的电击杯（0.1、0.2、0.4 cm）；

2. 使用无水乙醇消毒电击杯并用无离子水冲洗；

3. 将 80% 容积的样品加入电击杯中（避免溢出）；

4. 轻敲杯壁以排除气泡。

（二）仪器参数设置

1. 进入设置菜单：按“MENU”；

2. 设置电压 (V)：根据细胞类型输入，如 2000 V（细菌）；

3. 设置电容 (μF)：25–500 μF 之间；

4. 设置电阻 (Ω)：200–600 Ω；

5. 选择波形：指数衰减波（Exponential）或方波（Square）；

6. 设置脉冲次数：1–3 次；

7. 保存方案：按“SAVE”键保存参数组。

典型参数参考：

（三）执行电击

1. 将电击杯放入 ShockPod；

2. 关闭盖锁，屏幕显示“LID CLOSED”；

3. 按“PULSE”键进入充电状态；

4. 屏幕提示“READY TO PULSE”后按“ENTER”；

5. 放电完成后显示电压、时间常数与能量输出；

6. 屏幕出现“COMPLETE”提示音后再开盖。

（四）样品回收

放电后立即将样品转入复苏培养基中，促进细胞修复。

修复完成后进行转化筛选或表达检测。

五、数据记录与分析

伯乐 165-2661 会自动记录实验参数与输出结果，方便用户分析与比较。

1. 系统自动输出数据

• 实际电压 (Vout)；

• 时间常数 (τ)；

• 样品电阻 (Ω)；

• 能量释放比 (%)；

• 放电波形。

2. 数据导出

• 插入 USB 设备；

• 选择菜单“Data Export”；

• 选择文件格式（CSV 或 TXT）；

• 可用于后续统计分析或报告。

3. 实验记录模板

六、实验注意事项

1. 所有操作需在无菌条件下进行，防止污染；

2. 放电前确认盖锁闭合；

3. 不得使用高盐缓冲液；

4. 样品中不得有气泡；

5. 每次放电后等待 10 秒再进行下一次；

6. 放电结束后静置 5 秒再取样；

7. 使用结束后清洁 ShockPod 与电击杯；

8. 实验区保持干燥、无液体残留。

七、结果评估

1. 物理数据评估

• 时间常数稳定性：重复实验中波动 <±0.1 ms；

• 电压输出误差：≤ ±2%；

• 波形平滑度：无电弧或尖峰。

2. 生物学结果评估

• 转化效率（细菌）：≥10⁶ CFU/μg DNA；

• 转染率（真核细胞）：≥70%；

• 细胞存活率：≥80%；

• 无明显细胞裂解或变形。

八、实验优化方法

1. 电场强度优化
   根据细胞类型调整电压与间隙；
   电场强度过低会降低导入率，过高则造成电弧。

2. 缓冲液电导率优化
   降低离子浓度可提高时间常数稳定性。

3. 多脉冲模式
   对敏感细胞采用 2–3 次低电压脉冲，可提高生存率。

4. 温度控制
   样品与电击杯预冷能降低热损伤。

5. 时间常数调节
   保持在 4–8 ms 范围通常为最佳效果。

6. 数据追踪分析
   对比不同参数组的导入效率曲线，建立最优模型。

九、常见问题与解决

十、安全操作规范

• 操作者应佩戴绝缘手套；

• 禁止在运行中触摸仪器；

• 放电时保持安全距离；

• 电击槽周围禁止放置液体；

• 发现异常（闪光、气味、烟雾）立即断电；

• 定期校准电压模块。

十一、实验后维护

1. 关机与放电：实验结束后关闭主机并等待 10 秒放电完成；

2. 清洁仪器：用无水乙醇擦拭 ShockPod 与外壳；

3. 电击杯清洗：用去离子水冲洗 3 次并晾干；

4. 风扇除尘：每周清理通风口；

5. 防尘存放：加盖防尘罩，避免潮湿。

十二、长期性能验证

十三、实验实例简述

实例 1：E. coli 质粒转化

条件：0.2 cm 杯、2000 V、25 μF、指数波。
结果：时间常数 4.9 ms，转化效率 8×10⁶ CFU/μg DNA，存活率 85%。

实例 2：CHO 细胞转染

条件：0.4 cm 杯、550 V、500 μF、方波、3 脉冲。
结果：表达阳性率 78%，细胞活性 83%。

这些实例表明，165-2661 在多种生物体系中均表现出稳定、高效的导入性能。