质保3年只换不修，厂家长沙实了个验仪器制造有限公司

一、概述

本仪器基于电穿孔原理，通过在短时间内对样品施加高压脉冲，使细胞膜形成瞬时微孔，从而允许外源 DNA、RNA、蛋白质或纳米颗粒进入细胞内部。165-2661 型在结构、控制、数据记录等方面具有高精度、可重复性和综合安全保障。
实验步骤可细分为：样品准备、仪器设置、电击执行、样品回收与培养、结果评估。每一环节均有其关键要点和注意事项。

二、实验前准备

1. 环境与仪器检查

• 将仪器安放于平整、干燥、无强振动、无直射阳光的实验台上。

• 接通电源，确认 AC 220 V ± 10%，50/60 Hz，且插座已接地。

• 开机后仪器进行自检，确认盖锁检测、温度传感、自动放电系统、风扇散热系统均正常。

• 检查电击槽（ShockPod）内部是否干燥、无残液、无沉淀物。电击杯是否清洁、干燥、无裂纹或氧化。

• 准备电击杯、缓冲液、样品、外源分子、刻度移液器等。确保所有耗材无盐、无离子强度过高。

• 预设培养环境。若用哺乳动物细胞，预热培养基至 37 ℃；若用细菌或酵母，准备适宜转化/培养平板。

2. 样品准备

• 从周期培养或适宜状态下取细胞：细菌为对数生长期，酵母或真核细胞亦处于对数期。

• 离心、洗涤多次以去除培养基中高盐成分，使用低离子缓冲液或纯水重悬。

• 样品浓度调整至推荐范围：例如细菌约 1×10⁹ cells/mL，真核细胞约 1×10⁶–1×10⁷ cells/mL。

• 外源分子（DNA、RNA、蛋白）应纯度高、无盐，并缓慢加入样品中，轻柔混匀。

• 将混合样品置于冰上或低温条件（通常 0-4 ℃）预冷 5-10 分钟，以减少热效应。

• 移液至电击杯，体积一般为电击杯最大容积的 60-80%。避免液面高于电极上缘或产生气泡。

三、仪器参数设置

1. 进入设置界面

• 在主界面按“MENU（菜单）”键进入设置模块。

• 选择“Manual Setup（手动设置）”或“Preset Protocol（预设方案）”视实验需要。

2. 设定核心参数

以下是常规需设定的参数：

• 电压 (Voltage)：例如 400-700 V（真核细胞）、1200-1600 V（酵母）、2000-2500 V（细菌）等。

• 电容 (Capacitance)：例如 25-500 µF 细菌体系、小电容；500-1000 µF 真核或植物体系。

• 电阻 (Resistance)：根据样品电导率设定，一般 50-600 Ω。如仪器具自动匹配 “Auto-R” 选项可启用。

• 波形类型 (Waveform)：选择指数衰减波（Exponential）或方波（Square）模式，依据细胞类型与目的。

• 脉冲次数 (Pulse Count)：可设 1-10 次。敏感细胞可用多脉冲，耐受细胞可用单脉冲。

• 间隔时间 (Pulse Interval)：多次脉冲间隔建议 0.5-2 s，视样品耐受性而定。

• 保存参数方案：完成设定后按 “SAVE” 键保存当前参数组，以便日后调用。

3. 参数校验

• 检查设定的电压是否在仪器允许范围（10-3500 V）内。

• 检查电容与电阻组合是否合理，确保时间常数（τ = R × C）在适用范围。

• 确认电击杯间隙、样品体积、电导率等与设置参数匹配。

• 若使用梯度模式（Gradient Mode），设定起始电压、步长、次数。

四、电击执行步骤

1. 样品加载

• 将预冷样品转移到电击杯中，确认无气泡。

• 盖上杯盖并插入 ShockPod。

• 盖锁应听“咔哒”声提示闭合成功，仪器显示 “LID CLOSED – SAFE TO RUN”。

2. 放电操作

• 按 “PULSE” 键进入充电状态，仪器提示 “READY TO PULSE”。

• 按 “ENTER” 键执行放电。

• 放电过程中，仪器自动显示实际输出电压、时间常数、能量释放比例等数据。

• 放电结束后，屏幕提示 “COMPLETE”，系统进入冷却或退出状态。

3. 样品立即处理

• 放电结束后 5-10 秒再打开盖子，避免电弧残留。

• 将样品立即转入预热培养基或平板中，轻轻混匀。

• 细菌样品可立即置于适温培养，哺乳动物细胞转至 37 ℃ CO₂ 培养箱恢复。

• 记录本次放电参数、样品类型、体积、浓度、结果编号等，用于后续分析。

五、样品回收与培养

1. 细菌或酵母

• 放电后立即加入适量预温培养液（如 SOC、YPD 等），轻轻混匀。

• 在 37 ℃（细菌）或 30 ℃（酵母）温育约 30-60 分钟以允许细胞修复。

• 将适量样品铺平至选择性培养平板，培养至菌落形成。

2. 哺乳动物细胞

• 放电后转入含血清完全培养基，置于 37 ℃、5% CO₂ 条件培养。

• 静置 1-2 小时后可换培养基并继续培养至预定时间点。

• 后续可进行荧光标记、Western blot、流式检测等分析。

3. 植物原生质体

• 转入含甘露醇保护剂或适用于原生质体的培养液中恢复。

• 置于 25-28 ℃ 温和光照条件下，时间约 1-2 小时。

• 后续用于转基因表达、荧光观察或下游分析。

六、结果评估与数据记录

1. 仪器数据记录

• 仪器自动保存：实际输出电压、电阻、时间常数、能量释放比例、波形图。

• 可通过 USB 导出 CSV 或 TXT 文件，用于统计分析。

2. 生物学指标

• 转化/转染效率：细菌以 CFU/µg DNA 表示；真核细胞以阳性细胞占比表示。

• 细胞存活率：通过台盼蓝、PI 染色或流式计数评估。

• 表达水平：如荧光蛋白表达、qPCR 或 Western blot 检测。

• 重复性与稳定性：三次以上实验数据应波动较小（例如效率变化 <±15%）。

3. 分析与优化

• 整理不同参数组合与实验结果对应关系。

• 绘制转化效率-电压、时间常数-存活率等曲线。

• 根据趋势调整参数，进入下一轮优化。

七、清理与维护

• 实验结束后关闭电源。

• 等待 10 秒自动放电后再打开盖子。

• 用无水乙醇擦拭电击杯、电极及 ShockPod 内部，确保干燥。

• 清理通风口和风扇滤网，保持散热通畅。

• 定期（每月／每季度）校验输出电压、时间常数与波形稳定性。

八、安全与注意事项

• 电击前必须确认盖锁闭合，严禁操作中触摸电极。

• 样品缓冲液不得含高盐或气泡，避免电弧发生。

• 实验过程中应佩戴绝缘手套。若出现闪光、冒烟、异常声音，立即断电。

• 实验区域应远离液体、金属器具或未经接地的物体。

• 操作后样品应及时回收并对废液做高压灭菌处理。

九、典型流程总结

1. 检查仪器与环境；

2. 准备样品（浓度、电导率、体积）；

3. 设定仪器参数（电压、电容、电阻、波形、脉冲次数）；

4. 装载电击杯，检测盖锁状态；

5. 执行放电；

6. 样品转移至培养条件；

7. 记录数据与结果；

8. 清理仪器，维护设备。