伯乐电穿孔仪165-2660运行方法

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质保3年只换不修，厂家长沙实了个验仪器制造有限公司

一、概述

伯乐电穿孔仪 165-2660 是一种高性能电转化设备，通过短时高压脉冲在细胞膜上产生瞬时可逆微孔，使 DNA、RNA 或蛋白质进入细胞内部。
它广泛应用于分子克隆、细胞工程、基因编辑和生物制药领域。

该设备设计精密，能够实现精准的电场控制与可重复的放电特性。
科学掌握其运行方法，是确保实验成功、数据准确及设备安全运行的关键。

二、运行前准备

1. 环境要求

为保证运行稳定，应满足以下实验室条件：

温度：20–25℃；
相对湿度：30–60%；
电源：AC 220V ±10%，50/60Hz，接地电阻 ≤ 1 Ω；
实验台平整、防震、干燥；
环境无强磁场、无腐蚀性气体及粉尘。

2. 仪器检查

在运行前，需进行以下自检：

检查电源线、接地线完整无破损；
确认 ShockPod 电击槽干燥、清洁；
电击杯无裂纹、电极表面光滑；
模块（CE 或 PC）插接牢固；
电源插座独立使用，避免与离心机等高功率设备共线；
开机后系统自检通过，屏幕显示 “READY”。

如出现报警代码（ERR01–ERR05 等），需根据提示排查原因再进行运行。

3. 样品准备

正确的样品处理对电转化效果至关重要。

使用健康、对数生长期细胞；
去除培养基中的盐离子，采用低离子缓冲液（如无离子 PBS 或 1 mM HEPES）；
调整细胞浓度：

细菌：1×10⁹ cells/mL；
酵母：1×10⁸ cells/mL；
哺乳动物细胞：1×10⁶–1×10⁷ cells/mL；

加入 DNA 或 RNA 溶液并轻轻混匀；
样品与电击杯在冰上预冷 5 分钟。

三、仪器运行原理

165-2660 电穿孔仪的运行核心在于高压脉冲放电系统。
其工作过程可分为以下几个阶段：

充电阶段
电容器被高压电源充电，储存能量。
放电阶段
当按下“PULSE”键时，电容经控制电路瞬时放电，产生高电压电场。
穿孔阶段
电场作用下，细胞膜脂双层形成可逆微孔，外源分子进入细胞。
修复阶段
电击结束后，细胞膜迅速恢复完整性，外源物质保留在细胞内部。

四、运行模式选择

伯乐电穿孔仪 165-2660 提供多种运行模式，以适应不同实验需求。

1. 预设模式（Preset Protocol）

适用于常见细胞类型的标准电击。

从主菜单选择“Preset Protocol”；
选择对应细胞类型（如 E. coli、Yeast、CHO、HeLa 等）；
仪器自动加载推荐参数（电压、电容、波形、时间常数）；
按“ENTER”确认后进入运行界面。

2. 手动模式（Manual Setup）

用于个性化实验设计。
用户可自由设置：

电压（Voltage）：10–3000 V；
电容（Capacitance）：25–3275 μF；
电阻（Resistance）：50–1000 Ω 或 ∞；
波形（Waveform）：指数衰减波或方波；
脉冲次数（Pulse Count）：1–10 次；
时间常数（τ）：系统自动计算。

3. 用户程序模式（User Program）

允许用户保存或调用自定义方案。

可保存 99 组不同实验参数；
适合重复实验或多用户环境。

五、运行步骤

1. 样品装杯

将样品溶液缓慢加入电击杯，体积约占 80%；
轻轻敲击杯壁排除气泡；
不可有溢出或粘附液体于杯口；
确认电极无气泡遮挡。

2. 放置与盖锁

打开 ShockPod 上盖，将电击杯插入槽内；
使电极完全接触接口；
盖紧上盖并听到“咔哒”锁定声；
屏幕提示“LID CLOSED – SAFE TO RUN”。

3. 放电操作

按下“PULSE”键，仪器开始充电；
显示“CHARGING…”；
当屏幕提示“READY TO PULSE”时按“ENTER”；
系统执行放电，产生高压脉冲；
放电完成后显示电压、时间常数、能量百分比；
屏幕出现“COMPLETE”提示音后方可开盖取样。

4. 样品回收

放电结束后，立即将样品转入恢复培养基中。

细菌：37℃ 培养 30 分钟；
酵母：30℃ 培养 1 小时；
哺乳动物细胞：37℃ 培养 1–2 小时。

恢复期间细胞膜修复并开始表达导入的外源基因。

六、数据读取与分析

仪器可自动记录并存储运行数据，包括：

实际输出电压（Vout）；
电阻（Ω）；
时间常数（τ, ms）；
放电波形类型；
能量释放比例（%Energy）。

导出方法

插入 USB 存储设备；
打开菜单“Data Export”；
选择文件格式（CSV 或 TXT）；
导出完成后可在电脑中分析实验参数。

通过比对时间常数与理论值，可判断放电是否稳定、样品导电性是否合格。

七、安全运行要求

放电前必须确认盖锁闭合；
不得用潮湿手操作仪器或电击杯；
严禁使用含盐缓冲液；
每次放电后间隔 10 秒再进行下一次；
放电时远离仪器及金属器具；
若出现电弧或闪光，应立即停止运行；
运行中严禁开启上盖；
放电结束后等待 5 秒再取出电击杯；
操作人员须经过安全培训并穿戴绝缘手套；
实验区应配备灭火器和紧急电源开关。

八、运行优化与实验调整

1. 电压调整

细胞体积越小，所需电压越高；
建议逐步增加电压（每次 100–200 V），记录导入率与死亡率；
以高转化效率且细胞存活率 >80% 为最佳。

2. 电容与时间常数优化

时间常数 τ = RC；
短时间常数适合细菌，高时间常数适合真核细胞；
控制 τ 在 4–8 ms 之间可获得较好效果。

3. 波形选择

指数衰减波：单次高能放电，适合细菌、酵母；
方波：低电压多脉冲，适合哺乳动物细胞。

4. 多脉冲策略

多次短脉冲可在温和条件下提高导入率，常用于敏感细胞。

5. 缓冲液改进

使用专用 Electroporation Buffer 或低离子溶液可有效减少电弧。

九、常见运行异常与解决

现象	可能原因	处理方法
无法启动	电源或保险丝损坏	检查电源，更换保险丝
放电异常	模块松动或盖未闭合	重新安装模块并锁盖
电弧放电	样品含盐或气泡	更换 buffer、排除气泡
时间常数偏差大	样品导电性异常	调整细胞浓度或 buffer
风扇噪声大	灰尘堵塞	清洁通风口
电压下降	电容老化	更换电容组
屏幕无响应	面板受潮	擦干后重启

十、运行数据记录模板

日期	样品	电压(V)	电容(μF)	波形	τ(ms)	结果	备注
2025-10-25	E. coli DH5α	2000	25	指数波	5.3	成功	—
2025-10-26	CHO 细胞	550	500	方波	6.7	良好	—

所有运行数据应记录归档，用于后续分析和条件优化。

十一、运行后设备清理

放电后等待 10 秒，确保电荷释放；
关闭电源并拔掉插头；
ShockPod 用去离子水清洗并晾干；
电击杯用无离子水冲洗 3 次；
外壳用无水乙醇擦拭；
风扇与通风口每周清洁一次；
覆盖防尘罩，保持干燥。

十二、运行维护与周期检查

检查周期	检查项目	内容
每次使用	ShockPod、电击杯	清洁干燥、无盐残留
每周	风扇、电源线	检查运行正常
每月	输出电压与时间常数	校验误差 ≤ ±2%
每季度	电极接触电阻	不超过 0.05 Ω
每年	系统校准与固件更新	由专业技术人员执行