质保3年只换不修，厂家长沙实了个验仪器制造有限公司

一、概述

伯乐（Bio-Rad）电穿孔仪165-2660是一款精密的电转化设备，用于将外源DNA、RNA或蛋白质分子导入细胞、原生质体或组织样品中。该仪器通过在细胞膜上施加瞬时高压脉冲，产生可逆性纳米级孔洞，使分子能够透过细胞膜进入胞内，从而实现基因转化或转染。

作为国际实验室广泛使用的标准设备之一，165-2660以其高精度电压控制、宽范围电容可调与卓越的时间常数稳定性著称。为了确保实验的高效性与结果的可重复性，严格遵循规范化的操作流程至关重要。

本操作指南将从设备准备、参数设定、样品处理、放电操作、数据记录及安全收尾等环节，系统阐述165-2660的标准化操作步骤，帮助研究人员高效、安全地完成电穿孔实验。

二、实验前准备

1. 环境条件

• 温度要求：20–25°C

• 湿度要求：≤60%

• 电源规格：220V ±10%，50/60Hz，接地良好

• 操作台要求：干燥、平稳、无金属裸露与液体溅洒

• 照明条件：环境光充足，以便观察电极与显示状态

实验环境应避免高湿或强磁干扰，设备周围保持至少30 cm的通风间距。

2. 仪器检查

在正式实验前应进行全面设备检查：

仪器通电后进行自检，若屏幕显示“Ready”，则系统正常。

3. 试剂与材料准备

• 电转杯：标准规格0.1 cm、0.2 cm、0.4 cm，根据实验选择；

• 细胞样品：对数生长期细胞；

• 缓冲液：低离子强度缓冲液（如1 mM HEPES）；

• DNA/RNA溶液：纯度高、无盐残留；

• 无菌移液器与吸头：防止污染；

• 冰浴或冷却模块：用于放电前冷却样品。

样品应预冷至4°C，以减少电穿孔过程中热效应带来的细胞损伤。

三、设备启动与初始化

1. 连接电源与接地线。
   确认接地端牢固，以防静电或电压泄漏。

2. 按下电源键，设备自动进入自检程序。

3. 观察显示屏提示：若显示“System Ready”，则设备可操作；若出现“Check System”或“Error”，需重新启动或联系技术维护。

4. 确保安全盖处于开启状态，便于安装电转杯。

四、参数设定

1. 进入参数设置界面

按下“Set”或“Parameter”键，进入设置模式。使用旋钮或数字键输入参数值。

2. 电压设定

• 范围：0.2–2.5 kV

• 调节精度：0.01 kV

• 建议设置：

• 细菌：2.3–2.5 kV

• 酵母：1.0–1.5 kV

• 哺乳细胞：0.25–0.8 kV

• 植物原生质体：0.6–1.0 kV

电压过高可能引起电弧，过低则无法形成足够电场。

3. 电容设定

• 范围：25–3300 µF

• 推荐设置：

• 细菌：25 µF

• 酵母：50 µF

• 哺乳细胞：250 µF

• 植物原生质体：1000 µF

电容控制能量储存量，需与样品类型匹配。

4. 脉冲模式与时间常数

伯乐165-2660采用指数衰减放电。时间常数（τ）表示能量释放速率，单位为毫秒（ms）。系统会在放电后自动计算实际τ值。
理想范围：4–10 ms。

5. 预设存储

设备可保存多组实验程序，设置完成后按“Store”键保存参数组合，以便重复使用。

五、样品准备与装载

1. 细胞与DNA混合

在无菌条件下，将DNA或RNA加入预处理细胞悬液中：

• 混合后轻轻吹打均匀，避免气泡；

• 总体积约为80–100 µL（适用于0.2 cm电转杯）；

• 样品浓度：1×10⁸ cells/mL。

2. 电转杯处理

• 使用前彻底清洁并干燥；

• 若为一次性杯体，拆封后立即使用；

• 装样时液面应覆盖电极板。

3. 冷却操作

将装好样品的电转杯置于冰上或冷却模块中冷却1分钟。
冷却可防止热积累造成细胞膜破裂。

4. 安装电转杯

• 打开安全盖；

• 将电转杯插入电极槽，确保卡入定位槽；

• 关闭安全盖，系统显示“Ready for Pulse”。

六、放电操作

1. 放电步骤

1. 按下“Pulse”键启动放电；

2. 放电瞬间，显示屏同步显示实际电压与时间常数；

3. 放电结束后自动进入“Cooling”状态，系统释放残余电荷；

4. 当屏幕恢复显示“Ready”，方可取出电转杯。

整个放电过程持续时间极短（通常小于10毫秒），但能量释放极为集中。

2. 注意事项

• 操作期间不得触摸设备金属部位；

• 确保安全盖关闭，否则系统拒绝放电；

• 放电后等待至少10秒再取样，避免残余电荷。

七、样品回收与复苏

1. 样品转移

放电后立即用无菌吸头将样品转移至含适当培养基的离心管中。
若样品为细菌，可加入SOC培养基（37°C复苏1小时）。
若为哺乳细胞，则转移至含血清培养基中静置复苏2小时。

2. 样品复苏条件

复苏期间应避免剧烈震荡，以利细胞膜修复。

八、数据记录与结果监控

1. 时间常数与放电数据

实验结束后，记录设备显示的时间常数（τ）。
标准参考范围：

• 细菌：4–5 ms；

• 酵母：6–8 ms；

• 哺乳细胞：8–10 ms。

时间常数偏低说明放电过快或样品电阻低，偏高则代表能量释放过慢。

2. 电弧检测

若出现“ARC DETECTED”提示，说明放电过程中发生电弧放电，可能由以下原因引起：

• 样品中有气泡；

• 电转杯潮湿；

• 缓冲液离子浓度过高。

应重新制备样品并清洁电转杯后再试。

3. 数据保存

165-2660可自动存储最近1000组实验数据，包括：

• 电压与电容设定值；

• 实测时间常数；

• 放电次数；

• 电弧状态记录。

数据可通过USB接口导出，以供统计分析。

九、安全与维护

1. 操作安全

• 放电时严禁开启安全盖；

• 使用绝缘手套操作高压接口；

• 禁止在湿手条件下触摸设备；

• 确保接地线连接可靠。

2. 清洁与保养

• 实验后用无离子水清洗电极槽；

• 电转杯可用70%乙醇消毒后自然晾干；

• 不得使用含氯清洁剂；

• 外壳用干布擦拭，防止积尘。

3. 定期检查

• 每6个月检测电压与电容输出精度；

• 每12个月进行一次全面校准；

• 若长时间未使用，重新开机前应进行预热10分钟。

十、常见问题与处理

十一、实验后收尾

1. 关闭设备电源，待风扇停止后拔下电源线；

2. 清理工作台面与样品残留；

3. 将仪器覆盖防尘罩并存放于干燥处；

4. 记录实验编号、参数与结果，建立电子档案；

5. 若出现异常放电或设备报警，应填写维护记录表并通知管理员。

十二、结果验证与质量控制

为了确保实验的科学性与一致性，需定期验证设备性能：

1. 放电稳定性测试：
   连续10次相同条件放电，计算时间常数的平均值与标准差（SD < 0.2 ms）。

2. 电压精度验证：
   使用外部高压计测量输出电压，偏差不得超过±1%。

3. 转化效率验证：
   使用标准样品（如pUC19质粒与大肠杆菌DH5α）进行实验，对比历史转化效率，应在正常范围内波动（±10%）。

4. 安全功能验证：
   在安全盖打开状态下测试放电锁定功能，确保系统自动中断。

十三、参数优化建议

实验过程中，可根据样品反应情况微调参数以获得最佳结果：

若转化效率偏低，可微调电压±0.1 kV或调整电容以延长时间常数。