质保3年只换不修，厂家长沙实了个验仪器制造有限公司

一、概述

伯乐（Bio-Rad）电穿孔仪165-2661是一款高精度、高重复性电转化设备，广泛用于DNA、RNA或蛋白质等大分子进入细胞的电穿孔实验。该设备通过短时高压脉冲作用，使细胞膜形成可逆性微孔，从而实现外源分子的跨膜导入。

与传统化学转化法相比，电穿孔法的优点在于不依赖化学载体、转化效率高、适用细胞范围广、可控性强。伯乐165-2661在能量释放、时间常数控制、电弧检测与安全防护方面进行了系统优化，能适应多种实验体系（包括细菌、酵母、哺乳动物细胞和植物原生质体）。

本章节将系统阐述伯乐165-2661的标准操作流程、实验准备、参数设置、放电执行及数据分析等内容，为科研人员提供科学、规范、可重复的操作指导。

二、实验前准备

1. 实验环境要求

1. 室温保持在20–25°C；

2. 相对湿度控制在≤60%；

3. 工作台应平稳、干燥、无导电性；

4. 设备四周保持≥30 cm散热空间；

5. 禁止放置在强磁场、高频设备或水源附近。

2. 仪器检查

开机前应进行以下项目检查：

若系统启动后显示“Check System”或“Ground Error”，应立即停止操作并排查接地系统。

三、样品准备

1. 样品制备

以大肠杆菌为例，样品制备过程如下：

1. 接种菌株于LB液体培养基中，37°C摇床培养至OD₆₀₀≈0.4；

2. 离心4000 rpm，5分钟，弃上清；

3. 用冰冷10%甘油洗涤菌体3次，以去除培养基盐分；

4. 重悬于10%甘油溶液中，浓度约1×10⁹ cells/mL；

5. 加入1–2 µg质粒DNA，充分混匀后置冰上待用。

哺乳动物细胞样品应使用无血清缓冲液（如Opti-MEM），保持4°C以减少电热效应。

2. 电转杯选择

根据实验体系选择不同间隙电转杯：

所有电转杯使用前应预冷并检查无气泡。

四、仪器开机与自检

1. 将电源线连接至接地插座；

2. 打开主电源开关；

3. 仪器自动执行自检程序，检测高压模块、电容组、安全盖及温控系统；

4. 显示屏显示“Ready to Pulse”表示自检完成；

5. 若出现报警提示，应根据屏幕指令检查对应部位。

五、参数设置

1. 电压设定

按下“VOLTAGE”键，输入所需电压值（0.2–2.5 kV）。
不同体系推荐参数如下：

2. 电容选择

按“CAP”键选择电容档位，范围25–3300 µF。
系统通过电子切换实现不同能量输出。
能量计算公式：

E=12CV2E = \frac{1}{2}CV^2E=21CV2

其中E为能量（焦耳），C为电容（法拉），V为电压（伏特）。

3. 模式选择

按“MODE”键切换放电模式：

• SINGLE PULSE（单脉冲模式）：适合细菌体系；

• MULTI PULSE（多脉冲模式）：适用于哺乳动物细胞；

• PROGRAM（程序模式）：可调用保存参数组。

4. 参数确认

按“ENTER”键确认所有设定，屏幕显示完整配置：

vbnet复制编辑MODE: SINGLE PULSEVOLTAGE: 2.50 kVCAP: 25 µFSTATUS: READY

六、样品加载与放电操作

1. 样品加载

1. 取冰上预冷电转杯；

2. 吸取40–50 µL样品加入电转杯；

3. 检查无气泡后轻拍底部；

4. 插入仪器电极槽，确保接触良好；

5. 关闭安全盖。

2. 放电执行

1. 按下“PULSE”键启动放电；

2. 系统自动充电并释放储能；

3. 放电过程约需5–10毫秒；

4. 屏幕实时显示电压衰减与时间常数；

5. 放电完成后，显示“Pulse Complete”。

3. 放电后处理

1. 打开安全盖，取出电转杯；

2. 立即放置于冰上冷却2分钟；

3. 加入1 mL冰冷SOC培养基进行复苏；

4. 按实验体系继续培养、筛选或检测。

七、数据读取与分析

1. 实时显示

屏幕显示以下参数：

• 设定电压（kV）；

• 实际输出电压（kV）；

• 电容档位（µF）；

• 时间常数（ms）；

• 电弧状态（ARC或NONE）。

2. 判断实验成功与否

若出现“ARC DETECTED”，表示样品含盐或气泡，应重新制备样品。

3. 数据存储与导出

165-2661具备数据记录功能，可保存1000条实验记录。
操作步骤：

1. 按“VIEW”键查看历史记录；

2. 按“EXPORT”将数据导出至USB（TXT或CSV格式）；

3. 记录包括实验编号、时间、电压、电容、时间常数与状态。

八、安全注意事项

1. 放电时严禁触碰仪器、电缆或电转杯；

2. 样品缓冲液电导率不得超过10 µS/cm；

3. 设备必须接地良好；

4. 使用完毕后关闭电源并拔下插头；

5. 电极若潮湿或有残液，应彻底干燥后再用；

6. 若出现异响、烟雾或烧焦味，应立即断电检查。

九、实验后的清洁与关机

1. 清洁步骤

1. 用无水乙醇或去离子水清洁电极槽；

2. 电转杯用去离子水冲洗并晾干；

3. 擦拭仪器外壳，防止盐分积聚；

4. 通风口保持畅通，禁止覆盖。

2. 关机步骤

1. 关闭“POWER”开关；

2. 等待风扇完全停止；

3. 拔下电源插头；

4. 覆盖防尘罩。

十、常见问题及处理方法

十一、实验优化建议

1. 电压与电容匹配：电压越高、时间常数越短；低电压可配合大电容延长能量作用时间。

2. 温度控制：样品始终保持冰冷以减少热效应。

3. 缓冲液纯度：使用超纯水或低导电性试剂配制。

4. 电转杯维护：定期更换老化电极，防止能量释放不均。

5. 重复实验标准化：相同参数条件下偏差≤0.2 ms视为可重复。

十二、操作实例

细菌电转化实验流程（以E. coli DH5α为例）

1. 设定电压：2.5 kV；电容：25 µF；模式：Single Pulse；

2. 吸取40 µL样品装入电转杯；

3. 关闭盖体，按下“PULSE”；

4. 屏幕显示：

   vbnet复制编辑Voltage: 2.50 kV
   Time Const: 4.9 msARC: NONE
   

5. 放电完成后冰浴2分钟；

6. 加入1 mL SOC培养基复苏；

7. 涂布含抗性标记平板；

8. 37°C培养12小时，获得阳性克隆。

十三、维护与性能保持

1. 定期检测电压输出精度，误差≤±1%；

2. 电容组每年检测一次容量衰减率；

3. 每半年清洁一次风扇与散热片；

4. 每季度检查安全盖感应与报警系统；

5. 禁止私自拆解设备内部高压模块。

十四、结果判定与数据分析

实验结果可通过时间常数（τ）与转化效率共同评估：

• 时间常数稳定说明能量释放正常；

• 转化率高说明细胞活性与穿孔效率平衡良好；

• 若τ过短或出现电弧，需优化样品导电性。

典型放电曲线应呈指数衰减形态：

Vt=V0e−t/RCV_t = V_0 e^{-t/RC}Vt=V0e−t/RC

该曲线表征电容放电过程的稳定性，伯乐165-2661能实时测定该参数并显示数值。